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26
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详见说明书
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
4°C保存
- 规格：
100T/盒
准备工作：
固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
产品名称 Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格 100T/盒
特异性 人、大鼠、小鼠
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.Parkin 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
注意事项：
Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
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3-Benzoylthiazolidine-2-thione 70326-37-3 中文名：3-苯甲酰噻唑烷-2-硫酮 分子式：C10H9NOS2 酸性酯酶染液 Eosinstain
Betamethasone 378-44-9 中文名：倍他米松 分子式：C22H29FO5 中性酯酶染液 H-E dye
(S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone 101711-78-8 中文名：(S)-(+)-4-苄基-3-丙酰-2-恶唑烷酮 分子式：C13H15NO3 碱性酯酶染液 Wright'dye
5-Benzyl D-glutamate 2578-33-8 中文名：D-谷氨酸5-苯甲酯 分子式：C12H15NO4 双重酯酶染液 Wright - Giemsa dye composite
(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone 131685-53-5 中文名：(R)-(-)-4-苄基-3-丙酰基-2-恶唑烷酮 分子式：C13H15NO3 酸性品红（复红） 5g
人疱疹病毒6型(HHV-6)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T Annonacin 中文名： 分子式：C35H64O7 度：97.0%
人凝血因子V抗原 英文名称： Human Vcoagulation factor 5 Aigen 规格： 48T/96T 英文缩写： F5-Ag 4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-yl)carboxamido]ethyl]benzenesulfonamide 中文名： 分子式：C16H21N3O4S
人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 中文名：卡培他滨 分子式：C15H22FN3O6 度：98.0%
人凝血酶(TM)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 2',3'-diacetate 162204-20-8 中文名： 分子式：C19H26FN3O8
人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISAKit ELISA. 96T/48T 2-Aminonicotinic acid 中文名：2-氨基烟酸 分子式：C6H6N2O2
柠檬酸（CA）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名：苯甲酸利扎曲坦 分子式：C22H25N5O2
镍快速测试盒 Nickel rapid test case Ranitidine 66357-35-5 中文名：雷尼替丁 分子式：C13H22N4O3S 度：98.0% 关键词：
镍测试盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名： 分子式：C16H16N4O3 度：98.0%
尿酸含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Tropisetron 105826-92-4 中文名：盐酸托烷司琼 分子式：C17H21ClN2O2
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名：O-苄基-L-酪氨酸 分子式：C16H17NO3
Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒Ampicillin Trihydrate 7177-48-2 中文名：氨苄西林三水酸 分子式：C16H19N3O4S 普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
2-Acetylfluorene 781-73-7 中文名：2-乙酰芴 分子式：C15H12O 莫氏立克次体(RM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole 13369-74-9 中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑 分子式：C8H12N2 瑞氏－姬姆萨复合染液 Vascular permeability test solion
(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol 23190-16-1 中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇 分子式：C14H15NO 姬姆萨染液 Peroxidase staining
5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine 29927-08-0 中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺 分子式：C9H10N2S 巴氏染液（脱落细胞染色） Name
特点：
1. 产品仅供科研安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。
固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
| 产品名称 | Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒 |
| 规格 | 100T/盒 |
| 货号 | XG-Y7356 |
规格 100T/盒
特异性 人、大鼠、小鼠
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.Parkin 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
注意事项：
Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
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3-Benzoylthiazolidine-2-thione 70326-37-3 中文名：3-苯甲酰噻唑烷-2-硫酮 分子式：C10H9NOS2 酸性酯酶染液 Eosinstain
Betamethasone 378-44-9 中文名：倍他米松 分子式：C22H29FO5 中性酯酶染液 H-E dye
(S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone 101711-78-8 中文名：(S)-(+)-4-苄基-3-丙酰-2-恶唑烷酮 分子式：C13H15NO3 碱性酯酶染液 Wright'dye
5-Benzyl D-glutamate 2578-33-8 中文名：D-谷氨酸5-苯甲酯 分子式：C12H15NO4 双重酯酶染液 Wright - Giemsa dye composite
(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone 131685-53-5 中文名：(R)-(-)-4-苄基-3-丙酰基-2-恶唑烷酮 分子式：C13H15NO3 酸性品红（复红） 5g
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人凝血因子Ⅶ(FⅦ)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 中文名：卡培他滨 分子式：C15H22FN3O6 度：98.0%
人凝血酶(TM)ELISAKit ELISA. 96T/48T Capecitabine 2',3'-diacetate 162204-20-8 中文名： 分子式：C19H26FN3O8
人末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISAKit ELISA. 96T/48T 2-Aminonicotinic acid 中文名：2-氨基烟酸 分子式：C6H6N2O2
柠檬酸（CA）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Rizatriptan benzoate 145202-66-0 中文名：苯甲酸利扎曲坦 分子式：C22H25N5O2
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镍测试盒 Nickel test case 4-[2-(2-Amino-4,7-dihydro-4-oxo-1H-pymol[2,3-d]pyrimodin-5-yl)ethyl]benzoic acid methyl ester 中文名： 分子式：C16H16N4O3 度：98.0%
尿酸含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样 Tropisetron 105826-92-4 中文名：盐酸托烷司琼 分子式：C17H21ClN2O2
尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R) 作用： ELISA 规格： 48T/96T 进口分装 O-Benzyl-L-tyrosine 16652-64-5 中文名：O-苄基-L-酪氨酸 分子式：C16H17NO3
Parkin mRNA原位杂交试剂盒100T/盒Ampicillin Trihydrate 7177-48-2 中文名：氨苄西林三水酸 分子式：C16H19N3O4S 普氏立克次体(RP)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
2-Acetylfluorene 781-73-7 中文名：2-乙酰芴 分子式：C15H12O 莫氏立克次体(RM)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 48T
1-Allyl-3,5-Dimethylpyrazole 13369-74-9 中文名：1-烯丙基-3,5-二甲基吡唑 分子式：C8H12N2 瑞氏－姬姆萨复合染液 Vascular permeability test solion
(1R,2S)-2-Amino-1,2-diphenylethanol 23190-16-1 中文名：(1R,2S)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇 分子式：C14H15NO 姬姆萨染液 Peroxidase staining
5,6-Dimethyl-2-Benzothiazolamine 29927-08-0 中文名：5,6-二甲基-2-苯并噻唑胺 分子式：C9H10N2S 巴氏染液（脱落细胞染色） Name
特点：
1. 产品仅供科研安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。
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文献和实验相关实验
Semiquantitative PCR for the Detection of Exon Rearrangements in the Parkin Gene
Mutations in the parkin gene have been shown to be responsible for a substantial number of cases of autosomal recessive early onset parkinsonism (AR-JP, PARK2, OMIM 602544) worldwide (1 –4 ). The gene on chromosome 6q25.2-27 consists of 12
Parkinsons Disease: Assays for the Ubiquitin Ligase Activity of Neural Parkin
The identification of monogenic variants of Parkinson’s disease (PD) has provided novel insights into its unknown pathogenesis. As the first protein linked to autosomal-recessive forms of PD, Parkin became a welcome tool to explain
日本研究人员日前宣布，体内两种基因变异，导致线粒体“次品”在细胞内堆积，是造成青年型帕金森氏症发病的原因。 帕金森氏症患者会出现手脚震颤等运动障碍，给患者的日常生活造成很大困难。目前，日本国内有将近15万名患者，其中大半是老年病人，但其中也有10％左右是40岁以前发病的所谓青年型帕金森氏症患者。 此前的研究表明，如果“Parkin”和“PINK1”这两种基因出现变异，人在年轻时期就会患上帕金森氏症。 东京都临床医学综合研究所与顺天堂大学的研究人员共同研究了上述两种基因。他们发现，两种基因
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