- ￥1200
- EZBioscience
- A0012
- 美国
- 2026年06月01日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
500
- 英文名：
2×SYBR Green Color qPCR Mix
- 供应商：
EZBioscience
- 保存条件：
-20℃避光保存
- 规格：
500Rxns
一、试剂盒简介
本试剂盒采用了具有超强扩增能力和抗干扰能力的热启动DNA聚合酶，结合其高度优化的缓冲液体系和染料系统，使之具备了更强的扩增效率、抗干扰能力，更高的灵敏度和特异性。具有起峰更早，在相同情况下得到的荧光信号更强，Ct值更小，熔解曲线特异性更高等特点。
该试剂盒中EZBioscience™ 2× Color SYBR Green qPCR Master Mix预混了蓝色惰性染料，当其与预混有黄色染料的样品缓冲液混合后，混合液会变成黄色。这在移液时为实验人员提供了视觉帮助，能够极大地降低发生移液错误的风险。
二、产品组分
| Components | A0012 (500Rxns) |
| EZBioscience™ 2× Color SYBR Green qPCR Master Mix*1 | 5 ml |
| Sample Buffer (40× ) | 500 µl |
| 50× ROX Reference Dye 1*2 | 220 µl |
| 50× ROX Reference Dye 2*2 | 220 µl |
*1：包含Hot-start DNA Polymerase, dNTPs, Mg2+, 和blue dye。
*2：用于校正不同孔之间产生的荧光信号误差。
三、试剂保存条件
本试剂建议置于-20℃避光保存。
四、适用的仪器型号
本试剂盒适用于所有的荧光定量PCR仪：
| 使用ROX种类 | qPCR仪型号 |
| 不加ROX | Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon 2, Chromo4™; Cepheid SmartCycler®; Roche LightCyclerTM 480; Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Thermo Scientific PikoReal Cycler. |
| 加ROX1 | ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne™, StepOne Plus™ |
| 加ROX2 | ABI 7500, 7500 Fast, Quanti-Studio 3, 5, 6, 7, 12K Flex, Dx, ViiA™7; Stratagene MX4000™, MX3000P™, MX3005P™ |
五、关于qPCR反应是否良好的判断：
1、如果扩增曲线呈典型的S型曲线，背景荧光信号阶段、荧光指数扩增阶段及平台期均完整可见，熔解曲线单峰，内参Ct值在合理范围内（通常可在13 ~ 22之间，典型的内参Ct值在15 ~ 20之间），则可认为该反应正常；
2、如果同一个模板和引物的重复孔数据Ct值相差0.5以内；
同时满足以上两个条件的可以认为数据可用。
六、常见的注意事项、操作要点及优化方法：
1、实验开始前首先验证引物是否适用，标准与上述标准类似，主要观察扩增曲线与熔解曲线；
2、引物验证后应该分装为几份，防止污染或降解；
3、RNA的质量及cDNA的质量对qPCR的结果具有很大的影响，应尽量保证RNA不降解，通常建议RNA提取后尽快进行逆转录，避免反复冻融，或者多次逆转录。如果预计使用量较大，则可以一次多逆转几管cDNA。如果条件允许，cDNA建议优先保存在-80℃冰箱
七、关于qPCR引物的设计：
1、首先可以查询Google Scholar中的文献当中的引物，通常中等及以上水平期刊中的qPCR引物绝大多数可以直接使用；
2、NCBI数据库的Blast数据库中的primer blast提供了针对序列或者Gene ID的qPCR引物设计方案，可以每个基因设计2对引物，并进行合成、验证；
3、Primer Bank数据库中有部分已经验证过的引物可用，也可作为参考。
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文献和实验[1] Huang X, Zhang Z, Wang Z, et al. Targeting NF-kappaB-inducing kinase shapes B-cell homeostasis in myasthenia gravis[J]. Journal of Neuroinflammation, 2025, 22(1): 17.
[2] Pei Z, Deng K, Cao H, et al. AR-mediated YBX3 suppresses oocyte meiotic resumption in polycystic ovary syndrome by attenuating Pde3A and Ccnb1 expression[J]. Journal of Ovarian Research, 2026.
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qPCR 检测后进行功能评估。本研究对血浆外泌体 circLPAR1 可作为 CRC 高灵敏早期诊断标志物提供了新的证据。 qPCR 检测外泌体是强强联手还是无稽之谈？ 我们也许会有疑问：外泌体本来就少，提取的 RNA 就更少，后续做 qPCR 检测岂不是难上加难？想知道 qPCR 检测外泌体是否具有合理性，我们需要先了解如何进行这项实验。 实验过程： 1）外泌体提取 包括 Umibio 在内的很多公司都有针对各种不同样本的外泌体提取试剂盒。样本预处理阶段很重要，甚至决定了后续提取外泌体的纯度和量
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1、如何增加外泌体试剂盒的提取效率？ 答：首先，样品准备阶段确保样品的质量和数量充足；在提取阶段，加入 ECS 试剂后可以通过增加静置时间来提高提取效率，但同时也可能影响到纯度，因此静置时间也需要适当控制，初次实验可以考虑静置过夜。 2、离心后无法看到沉淀如何处理？ 答：样品中的外泌体是微量的存在，离心后无法看到沉淀属于正常现象。建议离心后用 PBS重悬沉淀时不仅洗脱肉眼可见的沉淀部位，还要吹洗离心管外侧靠近底部的狭长区域，具体位置根据离心机倾斜角度决定。建议在下次样品准备阶段确保样品的质量
