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- AAT Bioquest
- 11410
- 200T
- 2026年02月25日
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Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒
- 保存条件：
Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒
- 英文名：
Amplite® Colorimetric Enterokinase Activity Assay Kit
- 库存：
Amplite® Colorimetric Enterokinase Activity Assay Kit
- 供应商：
Amplite® Colorimetric Enterokinase Activity Assay Kit
- 规格：
200T
Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒
Amplite® Colorimetric Enterokinase Activity Assay Kit
货号：11410
Amplite 比色法肠激酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于酶活性的试剂盒，肠激酶（也称为肠肽酶）是由十二指肠壁中的细胞产生的丝氨酸蛋白酶，并且是人和动物消化系统中的关键酶。 肠激酶将胰蛋白酶原转化为其活性形式的胰蛋白酶，导致随后的胰腺消化酶的活化。 肠激酶的缺乏导致肠道消化障碍。 肠激酶的抑制可能通过抑制参与癌变和转移的蛋白酶而具有抗肿瘤作用。 因此，高度选择性和灵敏的肠激酶检测在生物化学应用中起着关键作用。 Amplite 比色肠激酶活性检测试剂盒为定量肠激酶活性提供了一种灵敏的检测方法。 在肠激酶切割后，肠激酶底物可以通过EK Yellow 在吸光度酶标仪中在405nm处检测。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收: | 405nm |
| 推荐孔板: | 透明底板 |
样品实验方案
简要概述
1.用稀释的肠激酶标准品（50μL）制备测试样品
2.加入等体积的肠激酶工作液（50μL）
3.在37°C孵育30-60分钟
4.监测OD增加到405nm
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. EK Yellow 原液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入EK Yellow （组分A）中以制备100X储备溶液。
2.肠激酶底物储备液（100X）：
将50μLDMSO（组分E）加入肠激酶底物（组分B）中以制备100X储备溶液。
3.肠激酶标准溶液（10ug / mL）：
将50uL ddH2O + 0.1％BSA加入肠激酶标准小瓶（组分D）中以制备10μg/ mL肠激酶原液。
2.标准溶液
肠激酶标准
将10μL10μg/ mL肠激酶标准溶液加入990μL分析缓冲液（组分C）中，得到100ng / mL肠激酶溶液（EK7）。 然后在测定缓冲液中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的肠激酶标准品（EK6-EK1）。 注意：EK标准仅用于阳性对照，不应作为酶活性的定量标准。
3.工作溶液
将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。 注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 配制的工作溶液不稳定，需快速使用。
样品分析
表1.在96孔透明底微孔板中肠激酶标准品和测试样品的布局。 EK =肠激酶标准品（EK1-EK7,1.56至100ng / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| EK1 | EK1 | ... | ... |
| EK2 | EK2 | ... | ... |
| EK3 | EK3 | ||
| EK4 | EK4 | ||
| EK5 | EK5 | ||
| EK6 | EK6 | ||
| EK7 | EK7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| EK1-EK7 | 50ul | 连续稀释（1.56至100 ng / mL） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分C） |
| TS | 50ul | 样品 |
1.根据表1和表2中提供的布局，将肠激酶标准品（EK），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底微孔板中。对于384孔板，使用25μL 每孔试剂代替50μL。
2.在肠激酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLEK工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLEK工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.将反应混合物在37℃孵育30-60分钟。
4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，在OD为405nm时进行路径检查。
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文献和实验参考文献
Optimization of the fermentation and downstream processes for human enterokinase production in Pichia pastoris
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A strategy for fusion expression and preparation of functional glucagon-like peptide-1 (GLP-1) analogue by introducing an enterokinase cleavage site
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Journal: Biotechnol J (2009): 1610
于该检测试剂盒对目标修饰的特异性） 测定广泛物种（包括哺乳动物细胞/组织、植物和细菌）的去甲基化酶活性 具有简单比色或荧光读数的快速微孔板版本 3 小时内即可提供数据 表征组蛋白乙酰化通路 提供可分析总体活性以及 H4 特异性的 HAT 活性的试剂盒。这些检测试剂盒可以检测 HAT 催化乙酰基从乙酰辅酶 a 供体转移到组蛋白肽的过程，该过程会生成乙酰化肽和 CoA-SH。然后通过 比色法或荧光法测定 CoA-SH 副产物： 比色法 - CoA-SH 作为生成 NADH
的技术支持，人家说六孔板细胞量不够，不知道您六孔板细胞量够吗？还有您后来做出来的结果咋样?有啥改进的地方没？好愁呀，希望得到您的帮助。急着毕业呀！ bin1986 我用的是悬浮细胞，接板密度大于10e6个，用的量完全够。如果这样子的话可能是你的化合物并没有激活casp-3吧 darcy913 你好，你以前应该用过caspase-3比色法检测试剂盒吧，虽然是很久以前的事了，用的是哪家公司的？效果怎么样？我用的是碧云天的，完全没
思的是，生命有机分子绝大多数具有手性，且几乎都以单一异构体形式存在。 自然界中氨基酸有 L 和 D 两种对映异构体，除甘氨酸不具有手性外，组成蛋白质的其他氨基酸几乎都为 L 型。D 型氨基酸作为哺乳动物神经和内分泌系统中一类重要的神经和激素调节物质，具有重要的生理功能。不同于 L 型，D 型氨基酸的含量往往较低，其来源除了通过自身的合成外，主要通过食物的摄入和体内肠道菌的合成，特别是部分哺乳动物自身难以合成的重要 D 型氨基酸。同时，宏基因组研究也揭示人类肠菌 D 型氨基酸的生物合成和与 II 型糖
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