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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
Mouse Myoblasts Cells
- 库存:
999
- 供应商:
厦门逸漠生物科技有限公司
- 肿瘤类型:
详询
- 细胞类型:
贴壁
- 品系:
C3H
- 组织来源:
肌肉
- 相关疾病:
详询
- 物种来源:
小鼠
- 免疫类型:
详询
- 细胞形态:
成肌细胞
- 是否是肿瘤细胞:
详询
- 器官来源:
详询
- 运输方式:
复苏发货或干冰发货(顺丰快递)
- 年限:
长期
- 生长状态:
正常
- 规格:
1*10^6
C2C12小鼠成肌细胞
一、细胞介绍
这是D. Yaffe 和 O. Saxel建立的小鼠成肌细胞株的亚克隆(由H. Blau等人构建)。C2C12细胞株分化很快,形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白2(BMP-2)处理,导致分化途径从成肌细胞转换成成骨细胞。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。
二、细胞特性
1) 来源:组织: 肌肉 品系:C3H 细胞类型: 成肌细胞
2) 形态:成肌细胞
3) 含量:>1x106 个/mL
4) 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
三、运输和保存
可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式
(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;
(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。
(3)具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
四、细胞接收后的处理
1) 收到细胞后,请检查发货培养瓶的状况,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2) 在显微镜下确认细胞生长状态时,最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下,同时给刚收到的细胞拍照,(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3) 观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。
4) 贴壁细胞:在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象,如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长,可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。
5) 悬浮细胞:T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。
6)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1:2传代 。
五、细胞培养步骤
1.培养基及培养冻存条件准备
1)准备DMEM培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
2. 细胞处理
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法
a. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
d. 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中,建议冻存一支备用,后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。
下面T25瓶为类
a,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
b,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度1-2xE6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
c,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。




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文献和实验1) 细胞消化液的配制及存储:我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液,BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube,于-20度冰箱中储存。2) 消化前的处理:当细胞生长至亚融和状态需要传代时,提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热,同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。3) 消化细胞:将预热的D-Hank's液洗细胞2次,2ml/25cm2,然后再加入预热的消化液,作用3-5min,并反复振荡,镜下观察。当细胞被消化
地控制细胞分化率。 RAW264.7 细胞三天不传代更容易分化,很难吹下,每一次接种密度都要控制好;培养过程中一般无法保证 100% 不分化,分化的细胞贴壁性比未分化的要强,传代时只要容易吹下的细胞就可;吹打的力度一定要轻,切勿暴力吹打。 图 8:分化的 RAW 264.7 细胞形态 ④C2C12 细胞 C2C12 细胞是小鼠成肌细胞,属于贴壁细胞,分化很快,形成可伸缩的肌管并生成特征性的肌蛋白。用骨形成蛋白 2(BMP-2) 诱导 C2C12 细胞,会导致 C2C12 细胞的分化途径从成肌细胞
章内容充实丰富,小编决定分两次给大家详细解读,本次重点阐述高通量数据分析部分。 一、样本介绍 本文所研究的样本是人和小鼠(C2C12)的肌母细胞(myoblasts ,GM)以及诱导分化后的肌管细胞(myotubes ,DM),每个样本有A,B两个重复进行RNA-Seq(在circRNA进行差异表达分析中,作者还用到了人肌营养不良(DMD)样本)。作者采用FindCirc软件流程检测circRNA,结果如下表: 表1 Number of detected linear and circular











