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细胞划痕实验服务
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板

划痕实验在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。价格低廉,操作简单。还有很重要的一点在于细胞外围环境简单单纯,容易控制。与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用,是研究细胞迁移体外实验中最简单的方法。
实验步骤
实验材料:细胞样品
实验仪器与耗材:6 孔板、marker 笔、直尺、枪头
实验试剂:无血清培养基、PBS
实验流程:
1) 铺板:处于对数生长期的细胞,胰蛋白酶消化成单细胞悬液,接种于6孔培养板;细胞铺板6*105个细胞/孔,确保第二天细胞能够长满,每孔最终的培养基总量2mL;
2) 细胞培养:37℃、5%CO2培养箱中培养24h;
3) 划痕:第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头),每孔划三道;
4) 清洗:PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基;
5) 拍照:4倍镜下进行拍照,保证划痕居中且垂直,注意背景一致,可按0,6,12,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定);
6) 数据分析
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文献和实验材料: 6孔板 marker笔 直尺 20微升枪头(灭菌) 无血清培养基 PBS 准备: 所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内) 流程: 1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2、在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。 3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂直于背后的横线划痕,枪头
本来是自己一直在园子里找教程,结果能找到的有用的信息都是需要积分才能看,几乎找遍全园子,也没有一个系统的教程。于是,我决定自己写一个帖子帮助那些跟我一样没有积分,需要帮助的战友,因为经历了之前的焦躁、无奈、急切,太理解这种心情了。首先,你需要下载一个image j的软件,这个很好找,园子里也有,就不赘述了。下面开始正式使用1.打开软件 选择你要处理的图片2.增强对比 选择process enhance contrast3.选择Normalize 将 satura...改为0.34.平滑边缘
细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。特点: 1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。3. 与包括活
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