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        伤口愈合/细胞划痕实验新方法分享

        互联网

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        细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

        特点:

        1. 在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。

        2. 非常适合研究细胞与胞外基质(ECM),细胞与细胞之间相互作用引起的细胞 迁移。

        3. 与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容,可用于分析细胞间的相互作用

        4. 研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。

        传统实验方法实验步骤:

        1. 培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。

        2. 细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。

        3. 细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。)

        4. 吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。


        5. 加入无血清培养基,拍照记录。

        6. 将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。

        7. 根据收集图片数据分析实验结果。

        Culture Insert方法

        1. 准备细胞,培养液,culture Insert。

        2. 如图,将细胞接种于Dish中间的Insert,细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可产生500 μm宽度的划痕。

        3. 每隔4-6小时拍照记录。

        4. 根据收集图片数据分析实验结果。

        总结:相比较于传统的划痕实验,Ibidi的设计更科学、重现性更好:

        除了保证划痕均一性的难题,相信各位同学觉得最难的还有后期实验结果的处理,这里给大家分享一个操作非常简单的在线软件,只需注册就可以免费使用,只要上传图片很快就能把实验结果发到注册邮箱,非常方便。

        Analysis Data Contains:

        Cell covered area

        Speed of closure (available ≥ 5 images)

        Acceleration characteristics (available ≥ 5 images)

        Overview chart

        Center piece approximation (available ≥ 10 images)

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