核酸染料
Super EvaGreen®是一种用于实时定量 PCR(qPCR)
的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR
Green I。除了有相似的光谱特性,Super EvaGreen 有三个主
要特点使它区别于 SYBR Green I 。
首先,Super EvaGreen®对 PCR 的抑制性远小于 SYBR
Green I。因此,使用 Super EvaGreen®进行的 qPCR 实验可
以使用快速 PCR 步骤。同时,Super EvaGreen®在实验中可
以使用较高的浓度,从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信
号。较高浓度的 Super EvaGreen®也消除了“染料重分布”的
缺陷,使 Super EvaGreen®既可用于多重 PCR,也可用于高
分辨率(高清晰)溶解曲线分析(HRM)。该分析正被越来
越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析。由于 SYBR
Green I 对 PCR 的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,
因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问
题,既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM。同时,染料重
分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的
DNA 链可能由于这种原因而无法检测到。
第二,Super EvaGreen®的稳定性极强。在正常的储存、
操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以
安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反,
SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强。
第三,Super EvaGreen®降低了细胞膜透性,因而比
SYBR Green 1 更加安全。独立实验室的测试结果显示,Super
EvaGreen®既没有诱变性也没有细胞毒性。相反,虽然 SYBR
Green I 本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常
DNA 的修复机制,使其有诱变增强作用。考虑到 PCR 的广
泛使用,其安全性应该足够重视。