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- 2025年07月16日
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Cas9X™ | 海星生物
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Cas9X™ | 海星生物
CRISPRa（基因激活）系统是用于激活内源性基因转录的强大工具，切割失活的Cas9（dCas9）连上转录激活子（如VP64、p65和HSF1），可以有效促进基因组特定位点的转录。研究显示，CRISPRa技术可以使得基因的转录得到了两倍到数千倍的增长，许多基因的活性甚至有了几个数量级的增加。
服务的内容：
客户提供相关的需要激活表达的基因信息，海星生物将按照基因的生物信息特点，设计gRNA、构建载体、包装病毒通过病毒转染到目的细胞，筛选出激高表达或者合适的gRNA序列，并构建成CRISPRa稳转细胞株，并使用Q-PCR对目的基因表达量进行检测，并依据客户的需求提供单克隆建立和表型的筛选服务。
CRISPRa技术服务的流程
服务优势：
通过内源基因组背景进行激活，激活表达量可以从2倍到几个数量级的提升。
CRISPRa vs ORF过表达
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文献和实验、非特异性互作。CRISPRa 的倍数更温和，但也意味着表型可能更弱、更难检出。 反馈调控：内源转录本的 5'/3' UTR 携带大量调控元件（miRNA 结合位点、AU-rich 元件等）。过表达质粒去掉 UTR 后，这些调控全部失效，蛋白量可能远超预期；CRISPRa 激活的完整转录本仍受这些调控约束，表达更"自然"。 --- CRISPRa 的几种实现方式和各自的强弱 系统 构成 激活强度 特点 dCas9-VP64 单个 VP64 激活域 较弱 结构简单，某些基因激活不足
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本身，而是通过转录抑制方式降低目标基因表达。 适合研究“降低表达”对细胞表型带来的影响。 7.3 CRISPRa / CRISPR-SAM：激活基因表达 CRISPRa用于增强目标基因表达。 在文库筛选中，CRISPR-SAM可以用于大规模基因激活筛选，从“功能获得”的角度寻找与目标表型相关的基因。 不同CRISPR文库功能对比 类型 作用方式 常见研究目标 CRISPR-KO 使基因失活 找关键基因、生存相关基因、表型相关基因 CRISPRi 抑制基因表达 研究表达降低后的功能
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