NEBNext 超保真 2X PCR 预混液 | NEB

品牌	货号	产品中文名称	产品英文名称
NEB	M0541	NEBNext®超保真 2X PCR 预混液	NEBNext®High-Fidelity 2X PCR Master Mix

货号	产品中文名称	产品英文名称	规格
M0541L	NEBNext 超保真 2X PCR 预混液	NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix	250 rxns
M0541S	NEBNext 超保真 2X PCR 预混液	NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix	50 rxns

产品特点
NEBNext^® 超保真 2X PCR 预混液是一种含有非热启动 NEBNext Q5^® 超保真 DNA 聚合酶的独创剂型。在适用于 Illumina 的第一代 NEBNext 标准流程文库制备试剂盒和适用于 Ion Torrent 的 NEBNext 文库制备试剂盒中，该产品均作为一个组分存在。
不过，新推出的热启动剂型 NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。所有 NEBNext Ultra II 试剂盒中均包含 NEBNext Ultra II Q5 预混液，用于 DNA 和 RNA 的文库制备。

NEBNext 超保真 2X PCR 预混液是一种含有非热启动 NEBNext Q5 超保真 DNA 聚合酶的独创剂型。在适用于 Illumina 的第一代 NEBNext 标准流程文库制备试剂盒和适用于 Ion Torrent 的 NEBNext 文库制备试剂盒中，该产品均作为一个组分存在。
NEBNext Ultra II Q5 预混液（NEB #M0544）现已商售，它能够进一步提高文库扩增的一致性，即使在 GC 富集区域依然表现优异。
这两种预混液中均含有 Q5 超保真 DNA 聚合酶，它是一种具备热稳定性的新型 DNA 聚合酶，具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，并且融合了具有增强持续合成能力的 Sso7d 结构域。Q5 还具有异的保真度（比 Taq DNA 聚合酶高 280 倍），错配率极低。
NEBNext 超保真 2X PCR 预混液包含 dNTP、Mg++ 以及专有缓冲液，仅需加入引物和 DNA 模板，即可稳健扩增。

图 1：已知低覆盖度区域中的不同 DNA 聚合酶的对比分析。
以人 IMR90 基因组 DNA 为样本制备文库，并根据 Index 将其拆分为单个样品进行文库扩增。使用 Phusion 超保真 DNA 聚合酶、KAPA HiFi™ HotStart ReadyMix 或 NEBNext® 超保真 2X PCR 预混液，进行 8 个循环的 PCR 扩增。使用 Illumina HiSeq® 2000 对文库进行测序。为了纠正每个文库有效 reads 数目的微小差异，从每个数据中随机抽取 1.8 亿个已对比到基因组上的 reads，平均覆盖度约为 6X。图中展示了每个文库中覆盖到人类基因组（Aird et. al. Genome Biology, 2011）不同低覆盖度区域的 reads 数。在三种酶/预混液的测试结果中，NEBNext 超保真 2X PCR 预混液展现性能。 图 2：不同 DNA 聚合酶的保真度对比。
在基于 PCR 的突变筛查试验中使用 lacZ 方法（改良自 Kermekchiev 等人在 2003 年提出的方法），对 Taq DNA 聚合酶（在标准 Taq 缓冲液中）、KAPA HiFi HotStart ReadyMix 和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液的保真度同时进行测定。结果（n ≥ 2）为与 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 的相对比值。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液中的 Q5 超保真聚合酶的保真度水平是 KAPA HiFi HotStart ReadyMix 中聚合酶的 10 倍以上。 图 3：针对不同 GC 含量（%）的基因组，DNA 聚合酶的对比分析。
使用 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对流感嗜血杆菌、沼泽红假单胞菌及人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq 2000 上进行测序。GC 覆盖度图已生成，X 轴为每 100 bp 的 GC 含量（%）。标准化覆盖度由蓝色圆圈表示，GC 含量（%）的窗口由红线表示，GC 含量（%）的碱基质量由绿线表示。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液大幅降低了三个基因组 DNA 样品的偏嗜性。 图 4：不同 GC 含量（%）下不同 DNA 聚合酶的对比分析。
使用 Index 引物和 NEBNext 超保真 2X PCR 预混液、Phusion™ 超保真 PCR 预混液（提供 HF 缓冲液）或 KAPA HiFi HotStart PCR ReadyMix，对人类基因组 DNA 文库进行扩增，并在 Illumina® HiSeq™ 2000 上进行测序。从每个数据集中随机选择相同数量的 reads，并根据 GC 含量绘制 reads 百分比图。NEBNext 超保真 2X PCR 预混液和 KAPA HiF HotStart ReadyMix 非常接近预期的 reads 频率（灰色阴影），Phusion 则不是。

产品来源

大肠杆菌菌株，携带 Q5 超保真 DNA 聚合酶基因。

产品类别:

Q5® 超保真 DNA 聚合酶产品

应用:

Polymerases for NGS Library Preparation,

Fast PCR,

High-Fidelity PCR,

Specialty PCR,

Routine PCR,

DNA Amplification, PCR & qPCR,

PCR

备注：以上仅为 M0541 的部分产品信息，如需NEB货号 M0541 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。