记忆障碍小鼠模型

来源:药物导致记忆障碍

模式动物品系:SPF级 KM小鼠，健康，雄性，4~6W，体重为30g左右。

实验分组:实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。

实验周期:2-3 weeks

建模方法

记忆获得障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射樟柳碱或东莨菪碱5mg/kg BW；

记忆巩固障碍模型制造：训练前10min 腹腔注射环已酰亚胺120mg/kg BW；

记忆再现障碍模型制造：重测验前30min 灌胃30％ 的乙醇10mL/kg BW。

一、被动行为试验--避暗实验

原理：

利用小鼠嗜暗的习性设计一个装置，一半是暗室，一半是明室，中间有一小洞相连。暗室底部铺有通电的铜栅，并与一计时器相连，计时器可自动记录潜伏期的时间。小鼠进入暗室即受到电击，计时自动停止。

仪器和试剂：

避暗仪：该装置分明暗两室。暗室较大，两室之间有一直径约3cm的圆洞。两室底部均铺以铜栅。暗室底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。一般采用40v电压（或0.3-0.4mA电流）底部中间位置的铜栅可以通电，电击强度可在一旋钮上任意选择。采用附带隔音箱和视频分析系统的仪器。

实验步骤：

受试样品对正常小鼠记忆的影响

末次给样后次日（或一次给样后1h）开始训练。实验时将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动计时器。动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时器自动停止，取出小鼠，记录每鼠从放入明室至进入暗室遭电击所需的时间，此即潜伏期，训练5min，并记录5min内电击次数。24h或48h后重作测验，记录每只动物进入暗室的潜伏期和5min内的电击次数，并计算5min 内进入暗室（错误反应）的动物百分率。以上实验步骤为记忆获得过程。停止训练5天后可以在不同的时间进行一次或多次记忆消退实验（即记忆再现过程）。

二、主动行为试验--Morris水迷宫实验

原理：

实验动物被强迫在水箱内游泳，观察并记录动物寻找到隐藏在水下平台所需的时间、游泳轨迹及其采用的策略，分析和推断动物的学习、记忆和空间定位等方面的能力。

仪器与试剂：

Morris水迷宫实验系统由圆形水池、图像自动采集和处理系统组成。图像自动采集和处理系统主要由摄像机、计算机、图像监视器组成，动物入水后启动监测装置，记录动物运动轨迹，实验完毕自动分析报告相关参数。

Morris水迷宫圆形水池为一圆柱形水桶，直径为120cm（小鼠），高为50-60cm，水池水深为30-40cm，一个圆形平台直径约为9cm（小鼠），藏匿于1cm的水面之下。水池的内部不得有任何标记，在圆桶的上缘等距离地设东、南、西和北4个标记点，作为动物进水池的入水点，以这4个入水点在水面和水桶底部的投影点作为参照位点，将水面和水桶部分均等的分为4个象限，按实验要求，可任意地将平台设置于某一象限的中间。适当的恒温设备使水温保持在23～25℃。水迷宫水池应配有良好的注水和排水设备，水池的位置一旦确定，就不要轻易变动，尤其在同一轮水迷宫的测试中。

水迷宫图像自动采集和处理系统：自动地采集动物的入水位置、游泳的速度、搜索目标的所需时间和运行轨迹等参数，并可对所采集的各种数据进行统计和分析。

实验步骤：

连续给予受试物后，实验前一天,大鼠自由游泳2min以熟悉环境，其间引导动物站上平台10s。次日开始训练，训练期间继续给样。

定位航行试验：用于测量实验动物对水迷宫学习和记忆获得的能力。训练天数依据动物的学习能力确定，每完成4个象限的训练当做1个循环，动物每次从1个象限的入水点入水，将动物面向池壁放入水中，仪器自动记录动物寻找并爬上平台的路线图、动物从入水到找到水下隐蔽平台并站立其上所需时间(逃避潜伏期)及游泳总路程。如果动物在90s内未找到平台，则需将其引至平台，这时潜伏期以90s计，让动物在平台停留10s后，再放回笼中。如此重复完成4个象限的试验，象限选择和各实验组动物训练顺序应随机确定或交叉进行。直至80-90%以上的动物在规定时间内找到平台或至少完成3个循环的试验，可终止试验。

空间探索试验：定位航行试验结束5天后，将水下平台撤除，按照定位航行试验的方法重复1个循环（共4个象限）的试验，动物每次从1个象限的入水点入水，记录90s内小鼠在水池4个象限中的游泳距离、路径、时间，据此推算平台所在象限数据占总距离、总时间的百分比及穿越平台的次数，用来反映大鼠对平台所在位置的空间记忆能力，以判断动物记忆储存及提取再现能力。

应用：用于记忆获得障碍、记忆巩固障碍和记忆再现障碍模型