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上海谷研
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产品名称：MnlI (10 U/µL)
Enzyme:MnlI
保存温度:-20℃
货期:2-3天
CompatibleBuffer:10xBufferG
OptimalReactionTemperature:37°C
SensitivetoHeatInactivation::Yes
MethylationSensitivity:NotCpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
ThermoScientificMnlIrestrictionenzymerecognizesCCTC(7/6)^sitesandcutsbestat37°CinGbuffer.SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.Note:AlsoavailableasaFastDigestenzymeforrapidDNAdigestion.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:MnlIproducesDNAfragmentsthathaveasingle-base3extensionwhicharemoredifficulttoligatethanblunt-endedfragments.MnlImayremainassociatedwiththecleavedDNA.ThismaycauseDNAbandshiftingduringelectrophoresis.ToavoidatypicalDNAbandpatterns,usethe6XDNALoadingDye&SDSSolutionforsamplepreparationorheatthedigestedDNAinthepresenceofSDSpriortoelectrophoresis.Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
MnlI (10 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
营养盐琼脂（AATCC30）特价英文：Nutrient-salts Agar 产品规格：250g 产品用途：用于检测纺织品的抗真菌活性
WLD培养基价格英文：WLD Medium 产品规格：250g 产品用途：用于酿造和工业发酵过程中细菌分离培养
不完全琼脂培养基特价英文：Incomplete Agar Medium 产品规格：250g 产品用途：用于纺织品微真菌影响评价试验
ISP培养基2价格英文：ISP Medium 2 产品规格：250g 产品用途：用于链霉菌培养和鉴别
氯霉素溶液（20mg）特价英文：产品规格：1ml*5 产品用途：每支添加于200ml氯硝胺18%甘油（DG18）琼脂中
LG培养基特价英文：(Linden Grain Medium) 产品规格：250g 产品用途：用于霉菌、酵母菌、耐热霉菌及细菌总数的检测，可用于PET瓶及无菌罐装生产线的无菌验证。
菌种培养基特价英文：Strain Medium(for B.Cereus) 产品规格：250g 产品用途：用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂供应英文：Tetracyline Examination Agar 产品规格：250g 产品用途：用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
亚硫酸盐琼脂价格英文：Sulfite Agar 产品规格：250g 产品用途：用于厌氧亚硫酸盐还原杆菌的试管计数(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂价格英文：Glucose Tryptone Agar 产品规格：250g 产品用途：用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)
改良亚硫酸盐琼脂价格英文：Sulfite Agar，modified 产品规格：250g 产品用途：用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)的分离培养和计数(SN标准) MnlI (10 U/µL)犬白介素4酶联免疫试剂盒
英文名称:Canine (dog) IL-4 ELISA Kit
反应性:Canine (dog)
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:1-2000 pg/ml
灵敏度:0.1 pg/ml
检测目标:IL-4
应用:Sandwich ELISA
Enzyme:MnlI
保存温度:-20℃
货期:2-3天
CompatibleBuffer:10xBufferG
OptimalReactionTemperature:37°C
SensitivetoHeatInactivation::Yes
MethylationSensitivity:NotCpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
ThermoScientificMnlIrestrictionenzymerecognizesCCTC(7/6)^sitesandcutsbestat37°CinGbuffer.SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.Note:AlsoavailableasaFastDigestenzymeforrapidDNAdigestion.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:MnlIproducesDNAfragmentsthathaveasingle-base3extensionwhicharemoredifficulttoligatethanblunt-endedfragments.MnlImayremainassociatedwiththecleavedDNA.ThismaycauseDNAbandshiftingduringelectrophoresis.ToavoidatypicalDNAbandpatterns,usethe6XDNALoadingDye&SDSSolutionforsamplepreparationorheatthedigestedDNAinthepresenceofSDSpriortoelectrophoresis.Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
MnlI (10 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
营养盐琼脂（AATCC30）特价英文：Nutrient-salts Agar 产品规格：250g 产品用途：用于检测纺织品的抗真菌活性
WLD培养基价格英文：WLD Medium 产品规格：250g 产品用途：用于酿造和工业发酵过程中细菌分离培养
不完全琼脂培养基特价英文：Incomplete Agar Medium 产品规格：250g 产品用途：用于纺织品微真菌影响评价试验
ISP培养基2价格英文：ISP Medium 2 产品规格：250g 产品用途：用于链霉菌培养和鉴别
氯霉素溶液（20mg）特价英文：产品规格：1ml*5 产品用途：每支添加于200ml氯硝胺18%甘油（DG18）琼脂中
LG培养基特价英文：(Linden Grain Medium) 产品规格：250g 产品用途：用于霉菌、酵母菌、耐热霉菌及细菌总数的检测，可用于PET瓶及无菌罐装生产线的无菌验证。
菌种培养基特价英文：Strain Medium(for B.Cereus) 产品规格：250g 产品用途：用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂供应英文：Tetracyline Examination Agar 产品规格：250g 产品用途：用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
亚硫酸盐琼脂价格英文：Sulfite Agar 产品规格：250g 产品用途：用于厌氧亚硫酸盐还原杆菌的试管计数(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂价格英文：Glucose Tryptone Agar 产品规格：250g 产品用途：用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)
改良亚硫酸盐琼脂价格英文：Sulfite Agar，modified 产品规格：250g 产品用途：用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数,平酸芽孢和厌氧芽孢)的分离培养和计数(SN标准) MnlI (10 U/µL)犬白介素4酶联免疫试剂盒
英文名称:Canine (dog) IL-4 ELISA Kit
反应性:Canine (dog)
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
检测范围:1-2000 pg/ml
灵敏度:0.1 pg/ml
检测目标:IL-4
应用:Sandwich ELISA
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