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深圳子科生物
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120T
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文献和实验一、原理 蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与二价铜离子作用生成紫红色的络合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正比,但双缩脲反应并非蛋白质特有的颜色反应,分子中含二个以上肽键者有此反应。 二、双缩脲 试剂 未失结晶水的硫酸铜(CuSO 4· 5H 2 O)3.0g溶于500ml新鲜制备的 蒸馏 水或刚煮沸冷却的去离子水中,加酒石酸钾钠(NaKC
物质浓度。 两点终点法常应用于双试剂的测定项目中,多数第一试剂通常只含缓冲液等成分,它与样本一般不起特异性反应;因此在第二试剂加入前,选择一个测光点作为第一读数点,此时的吸光度相当于样品空白。加入第二试剂后待测物质起反应,并经过一定时间反应到达平衡点,此时选择第二个读数点,两读数点吸光度之差用于计算待测物质浓度。 两点法能有效消除样品溶血、黄疸、脂浊等造成的光吸收干扰。如:酶法测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、肌酐,以及化学法测定总蛋白、总胆红素、直接胆红素、钙、磷、镁、铁等;并且都能在加入
1、凯氏定氮法仍然是建立各个具体方法时采用的参考标准方法。2、双缩脲比色法是目前首先推荐的蛋白质定量方法。方法操作简便,虽然双缩脲试剂有大同不异。其中酒石酸钾纳可以稳定在碱性溶液中的铜离子,含有碘化物作为抗氧化剂。双缩脲反应生成的复合物其吸收峰为540nm。可采用公认的标准牛血清白蛋白作为标准品,经精确称量,必要时用凯氏定氮法标定。各地质控中心提供的混合标准血清可作为第二参考,血清用量100μl,在10-120g/L浓度范围内呈良好线性关系,批内CV值3、基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使
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