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- 2025年12月16日
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- 库存：
20
- 英文名：
Puc19plasmid
- 保质期：
有效期5年
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
支
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
pUC19在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
产品名称：pUC19
英文名称:Puc19plasmid
储存条件:-20℃，有效期5年
单位:支
pUC19是一种常用克隆载体，由pBR322改造而来，含有抗氨苄青霉素基因、LacZ基因及与M13mp18相同的多克隆位点。这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向相反。重组pUC18/19的克隆转化细胞可用蓝/白斑法筛选。宿主菌：建议用E.coliDH5α、JM109及XL1-Blue做受体菌。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
STK3 Polyclonal Antibody资源名称:人膀胱移行细胞癌细胞英文: STK3 Polyclonal Antibody 种属 :T24
NELFE Polyclonal Antibody资源名称:人子宫内膜腺癌(转移)细胞英文: NELFE Polyclonal Antibody 种属 :AN3CA
GTF3A Polyclonal Antibody资源名称:大鼠胰岛β细胞瘤细胞英文: GTF3A Polyclonal Antibody 种属 :RIN-m5F
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F2RL3 Polyclonal Antibody资源名称:人SV40转染成骨细胞英文: F2RL3 Polyclonal Antibody 种属 :hFOB 1.19
CLIP1 Polyclonal Antibody资源名称:人胰腺肿瘤细胞英文: CLIP1 Polyclonal Antibody 种属 :BxPC-3
EZH2 Polyclonal Antibody资源名称:绿色荧光蛋白标记人结直肠癌细胞英文: EZH2 Polyclonal Antibody 种属 :HCT116-GFP
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SPTLC1 Polyclonal Antibody资源名称:人卵巢颗粒细胞瘤英文: SPTLC1 Polyclonal Antibody 种属 :KGN
MATN4 Polyclonal Antibody资源名称:人卵巢癌细胞英文: MATN4 Polyclonal Antibody 种属 :HO8910PM
ABCC9 Polyclonal Antibody资源名称:大鼠肺动脉平滑肌细胞英文: ABCC9 Polyclonal Antibody 种属 :PASMCS
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TCEB3 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠逆转录病毒包装细胞英文: TCEB3 Polyclonal Antibody 种属 :PT67
CD79A Polyclonal Antibody资源名称:人NK/T细胞淋巴瘤细胞英文: CD79A Polyclonal Antibody 种属 :SNT8 NK/T
GPC1 Polyclonal Antibody资源名称:罗猴胎肾细胞英文: GPC1 Polyclonal Antibody 种属 :MA-104
pUC19人胶原蛋白α1酶联免疫试剂盒
英文名称:Human Collagen I alpha 1 Elisa Kit
反应性:Human
灵敏度:15 pg/ml
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文献和实验相关专题 那些实验室常用的克隆载体 pUC18 和 pUC19质粒图谱 pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的质粒载体，其结构组成紧凑，几乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注册号为 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而来，其中 lacZ (MSC)来自 M13mp18/19 图 3-4 是其质粒图谱 。 这两个质粒的结构几乎是完全
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
的DNA分子，大小在1Kb-200Kb左右，通常质粒DNA带有利于细菌在某一特定环境下生存的酶的基因，而使寄主菌表现以下一些表现型: 1．对抗生素的抗性 2．产生抗生素 3．降解有机复合物 4．产生大肠杆菌素 5．产生内毒素 6．产生限制修饰酶 pUC19质粒上带有一个与大肠杆菌抗氨苄青霉素(Ampecillin)有关的基因，它能编码一种β-内酰胺酶，这种酶降解氨苄青霉素，从而消除了抗生素对细胞壁形成的抑制
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