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- 2025年12月16日
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- 详细信息
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48
- 英文名：
E.coliTOP10CompetentCells
- 保质期：
至少6个月
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-70℃保存，液氮保存至少一年，-70℃保存
- 规格：
袋
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
产品名称：TOP10感受态细胞
英文名称:E.coliTOP10CompetentCells
储存条件:-70℃保存，液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月
外观（性状）:干冰运输，单加10kg干冰费
单位:袋
本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存六个月转化效率不发生改变。基因型：F_mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74recA1deoR araD139Δ(ara-leu)7697galUgalKrpsL(StrR)endA1nupG特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）1，将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。注意事项：1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
TOP10感受态细胞在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
以下是公司正在热销的产品：
CYFIP1 Polyclonal Antibody资源名称:正常星形胶质细胞英文: CYFIP1 Polyclonal Antibody 种属 :HA1800
LRP2 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠胰腺癌细胞英文: LRP2 Polyclonal Antibody 种属 :Pan02
YWHAZ Polyclonal Antibody资源名称:大鼠胰岛细胞瘤细胞英文: YWHAZ Polyclonal Antibody 种属 :INS-1
LCP1 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠海马神经元细胞系英文: LCP1 Polyclonal Antibody 种属 :HT22
GARS Polyclonal Antibody资源名称:人胃腺癌细胞英文: GARS Polyclonal Antibody 种属 :AGS
MAPKAPK3 Polyclonal Antibody资源名称:甲状腺乳头状细胞癌英文: MAPKAPK3 Polyclonal Antibody 种属 :K1
LCP2 Polyclonal Antibody资源名称:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞英文: LCP2 Polyclonal Antibody 种属 :PC-12[PC12]
WNT4 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠主动脉内皮细胞英文: WNT4 Polyclonal Antibody 种属 :MAEC（C57小鼠）
HELLS Polyclonal Antibody资源名称:大鼠嗜碱性细胞白血病细胞英文: HELLS Polyclonal Antibody 种属 :RBL-2H3
HOXA10 Polyclonal Antibody资源名称:人急性淋巴白血病细胞英文: HOXA10 Polyclonal Antibody 种属 :Kasumi-1
HSD17B13 Polyclonal Antibody资源名称:鸡巨噬细胞英文: HSD17B13 Polyclonal Antibody 种属 :HD11
BMP15 Polyclonal Antibody资源名称:人血管平滑肌细胞英文: BMP15 Polyclonal Antibody 种属 :HVSMC
ANPEP Polyclonal Antibody资源名称:人气道平滑肌细胞英文: ANPEP Polyclonal Antibody 种属 :hASMC
MX1 Polyclonal Antibody资源名称:人主动脉血管平滑肌细胞英文: MX1 Polyclonal Antibody 种属 :T/G HAVSMC
P2RY2 Polyclonal Antibody资源名称:人滑膜成纤维细胞英文: P2RY2 Polyclonal Antibody 种属 :HFLS
生物素标记的小鼠抗羊IgG资源名称:人胶质母细胞瘤细胞 种属 :A172
TOP10感受态细胞人上皮性钙黏附蛋白elisa检测试剂盒
英文名称:Human E-cadherin ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:90 pg/ml
检测目标:E-cadherin/CD324/CDH1
应用:Sandwich ELISA
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
产品名称：TOP10感受态细胞
英文名称:E.coliTOP10CompetentCells
储存条件:-70℃保存，液氮保存至少一年，-70℃保存至少6个月
外观（性状）:干冰运输，单加10kg干冰费
单位:袋
本公司生产的TOP10感受态细胞是采用大肠杆菌TOP10菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-70℃保存六个月转化效率不发生改变。基因型：F_mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74recA1deoR araD139Δ(ara-leu)7697galUgalKrpsL(StrR)endA1nupG特点：一种用于铺制与培养质粒平板和粘粒平板的重级缺陷的抑制型菌株。其中φ80lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补，可用于蓝白斑筛选。该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。操作方法：（以下各步骤均为无菌操作）1，将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100ul感受态细胞为例。2、向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。3、将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。4、向离心管中加入500ul无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。5、取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100ul左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300ul的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的平板。注意事项：1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到最低。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
TOP10感受态细胞在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
以下是公司正在热销的产品：
CYFIP1 Polyclonal Antibody资源名称:正常星形胶质细胞英文: CYFIP1 Polyclonal Antibody 种属 :HA1800
LRP2 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠胰腺癌细胞英文: LRP2 Polyclonal Antibody 种属 :Pan02
YWHAZ Polyclonal Antibody资源名称:大鼠胰岛细胞瘤细胞英文: YWHAZ Polyclonal Antibody 种属 :INS-1
LCP1 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠海马神经元细胞系英文: LCP1 Polyclonal Antibody 种属 :HT22
GARS Polyclonal Antibody资源名称:人胃腺癌细胞英文: GARS Polyclonal Antibody 种属 :AGS
MAPKAPK3 Polyclonal Antibody资源名称:甲状腺乳头状细胞癌英文: MAPKAPK3 Polyclonal Antibody 种属 :K1
LCP2 Polyclonal Antibody资源名称:大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞英文: LCP2 Polyclonal Antibody 种属 :PC-12[PC12]
WNT4 Polyclonal Antibody资源名称:小鼠主动脉内皮细胞英文: WNT4 Polyclonal Antibody 种属 :MAEC（C57小鼠）
HELLS Polyclonal Antibody资源名称:大鼠嗜碱性细胞白血病细胞英文: HELLS Polyclonal Antibody 种属 :RBL-2H3
HOXA10 Polyclonal Antibody资源名称:人急性淋巴白血病细胞英文: HOXA10 Polyclonal Antibody 种属 :Kasumi-1
HSD17B13 Polyclonal Antibody资源名称:鸡巨噬细胞英文: HSD17B13 Polyclonal Antibody 种属 :HD11
BMP15 Polyclonal Antibody资源名称:人血管平滑肌细胞英文: BMP15 Polyclonal Antibody 种属 :HVSMC
ANPEP Polyclonal Antibody资源名称:人气道平滑肌细胞英文: ANPEP Polyclonal Antibody 种属 :hASMC
MX1 Polyclonal Antibody资源名称:人主动脉血管平滑肌细胞英文: MX1 Polyclonal Antibody 种属 :T/G HAVSMC
P2RY2 Polyclonal Antibody资源名称:人滑膜成纤维细胞英文: P2RY2 Polyclonal Antibody 种属 :HFLS
生物素标记的小鼠抗羊IgG资源名称:人胶质母细胞瘤细胞 种属 :A172
TOP10感受态细胞人上皮性钙黏附蛋白elisa检测试剂盒
英文名称:Human E-cadherin ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:90 pg/ml
检测目标:E-cadherin/CD324/CDH1
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验相关实验
TOP10 chemically competent cells
Overview This protocol is a variant of the Hanahan protocol [1] using CCMB80 buffer for DH10B, TOP10 and MachI strains. It builds on Example 2 of the Bloom05 patent as well. This protocol has been tested on TOP10, MachI and BL21(DE3) cells
The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
xiaomage124 请问丁香园里的战友们，谁做过点突变？TOP10F'是不是甲基化菌株？恳请指教，多谢啦！:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能，因为我要做点突变，如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了，以下是此菌株对应的基因型，多谢啦！:) F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara
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