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43
- 保质期:
有效期1年
- 供应商:
上海谷研
- 保存条件:
RT,避光
- 规格:
支
别名:核酸染色液(10000X)
储存条件:RT,避光,有效期1年
单位:支
红色荧光核酸染料是一种高度灵敏的荧光染色剂,常用于琼脂糖凝胶和聚凝胶电泳后核酸染色。该染料与DNA结合后在紫外光透射仪激发下放射出橙红色荧光,可用Polaroid底片或带CCD成像头的凝胶成像处理系统拍摄。结合DNA染料的复合物荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍,所以当凝胶中含有游离的红色荧光核酸染料(0.5ug/ml)时,可以检测到少至10ng的DNA条带。 使用方法: 1、胶染:将100ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)放入微波炉中融化,冷却至60℃左右(不烫手时)后加入5-10ul染料,轻轻摇匀后倒胶(避免产生气泡),待胶完全凝固后上样电泳,电泳完毕在紫光灯下观察拍照 (注:由于在该染料存在的情况下,线状DNA的电泳迁移率约降低15%)。2、泡染:琼脂糖凝胶电泳后,将胶浸没在含有染料(3ug/ml)的电泳缓冲液或去离子水中,室温下染色15-45min(取决于凝胶厚度)。脱色时用去离子水或者1mM的MgSO4溶液室温浸泡约10-30min可降低背景荧光(可选)。 注意事项: 1,本品为强烈的诱变剂,使用时请注意安全。 2,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
作用及原理:
⒈溶液I—溶菌液:
溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II-NaOH-SDS液:
NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。
但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
红色荧光核酸染料在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理,可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一,盐析即在高浓度Nacl溶液中,蛋白质析出的现象。原理如下
(1)Nacl溶液与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;
(2)Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出;
2.不同浓度下DNA分子构象(三维结构)不同,不同的构象溶解度也不同。
(1)当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时,DNA溶解度最小,因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出;
(2)DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高;
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液,使得蛋白质析出,而DNA溶解度较大,通过高速离心,取上清并去除沉淀,进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂:
原则:不与DNA反应,对其无影响。
1.纯乙醇(二倍体积比);效率高,需要放置的时间短,在公司用Kit提取的时候,没有放置直接进行下一步;确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇,价格相对于纯乙醇便宜,但是会损失DNA;
3.异丙醇(0.6倍体积);
(1)普通细胞上清液体,静止15-30min即可沉淀;
(2)对于含量低,或者组织(比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA),则最好在-20℃放置2h或者以上,
本人提取肝脏组织DNA时候,最长时间放置了三天,对结果并无影响;上周提取细胞中cccDNA的时候,室温放置了15min,结果提出的DNA含量也挺高的,而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高,所以时间短点也可以,但是如果时间不是很着急,还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品:
ING5 Polyclonal Antibody 种属 Variovorax│ginsengisoli英文: ING5 Polyclonal Antibody应用领域极端微生物/低温菌(15℃)
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GPR68 Polyclonal Antibody 种属 Pseudomonas│mosselii英文: GPR68 Polyclonal Antibody 模式菌株no
LZTR1 Polyclonal Antibody 种属 Vibrio│azureus英文: LZTR1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
红色荧光核酸染料人硫氧还蛋白1elisa检测试剂盒
英文名称:Human Thioredoxin-1 ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:30 pg/ml
检测目标:Thioredoxin-1/Trx1
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验各种核酸染料对比,请知道的一起完善 名称 厂家 浓度 包装 价格〔元〕 颜色 染料类型
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DuRed核酸染料特点 ● 无毒性:DuRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内,艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于EB。 ● 灵敏度高:适用于各种大小片段的电泳染色,对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。 ● 稳定性高: 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶;室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定,耐光性强。 ● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。 ● 操作简单:与 EB 一样,在预制胶和电泳过程中染料
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