VspI (AseI) (10 U/µL)

产品名称：VspI (AseI) (10 U/µL)
Enzyme:VspI(AseI)
保存温度:-20℃
货期:2-3天
CompatibleBuffer:10xBufferO
OptimalReactionTemperature:37°C
SensitivetoHeatInactivation::Yes
MethylationSensitivity:NotCpGmethylation-sensitive, Notdammethylation-sensitive, Notdcmmethylation-sensitive
ThermoScientificVspI(AseI)restrictionenzymerecognizesAT^TAATsitesandcutsbestat37°CinObuffer.SeeReactionConditionsforRestrictionEnzymesforatableofenzymeactivity,conditionsfordoubledigestion,andheatinactivationforthisandotherrestrictionenzymes.Note:AlsoavailableasaFastDigestenzymeforrapidDNAdigestion.Isoschizomers:AseI,PshBI.ThermoScientificconventionalrestrictionendonucleasesarealargecollectionofhighqualityrestrictionenzymes,optimizedtoworkinoneofthebuffersoftheFiveBufferSystem.Inaddition,theuniversalTangobufferisprovidedforconvenienceindoubledigestions.Alloftheenzymesexhibit100%activityintherecommendedbufferandreactionconditions.Toensureconsistentperformance,ThermoScientificrestrictionenzymereactionbufferscontainpremixedBSA,whichenhancesthestabilityofmanyenzymesandbindscontaminantsthatmaybepresentinDNApreparations.Features•Superiorquality—stringentqualitycontrolandindustryleadingmanufacturingprocess•Convenientcolor-codedFiveBufferSystem•IncludesuniversalTangobufferfordouble-digestions•BSApremixedinreactionbuffers•WideselectionofrestrictionendonucleasespecificitiesApplications•Molecularcloning•Restrictionsitemapping•Genotyping•Southernblotting•Restrictionfragmentlengthpolymorphism(RFLP)•SNPNote:Formethylationsensitivity,refertoproductspecifications.
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
VspI (AseI) (10 U/µL)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。

根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；

3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
胰胨大豆琼脂斜面（TSA）特价英文：Tryptic Soy Agar  产品规格：250g  产品用途：培养副溶血性弧菌，做细胞色素氧化酶实验（SN标准）  
42℃生长培养基特价英文：42℃growth Medium  产品规格：250g  产品用途：用于副溶血性弧菌42℃生长试验（SN标准）  
O/F培养基(HLGB)供应英文：O/F Medium  产品规格：250g  产品用途：用于鉴别弧菌葡萄糖代谢类型（发酵型或氧化型）（SN标准）  
氯化钠结晶紫增菌液说明书英文：Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth  产品规格：250g  产品用途：用于副溶血性弧菌的选择性增菌培养（GB标准）  
氯化钠蔗糖琼脂价格英文：Sodium Chloride Sucrose Agar  产品规格：250g  产品用途：用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）  
嗜盐菌选择性琼脂特价英文：Halophilic Bacteria Selective Agar  产品规格：250g  产品用途：用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）  
氯化钠血琼脂基础特价英文：Sodium Chloride Blood Agar Base  产品规格：250g  产品用途：用于副溶血性弧菌的溶血试验（GB标准）  
霍乱双糖铁琼脂(KIA)说明书英文：KIA  产品规格：250g  产品用途：用于霍乱弧菌的生化试验（SN标准）  
T1N1琼脂供应英文：T1N1 Agar  产品规格：250g  产品用途：用于霍乱弧菌的培养（SN标准）  
T1N0肉汤特价英文：TIN0 Broth  产品规格：250g  产品用途：用于霍乱弧菌的生长试验（SN标准）  
T1N3肉汤说明书英文：T1N3 Broth  产品规格：250g  产品用途：用于霍乱弧菌的生长试验（SN标准）  
VspI (AseI) (10 U/µL)人再生胰岛衍生蛋白1βelisa检测试剂盒
英文名称:Human REG1B ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:2 pg/ml
检测目标:REG1B
应用:Sandwich ELISA