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X-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物

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  • 上海谷研
  • GOY-C6511
  • 进口、国产
  • 2025年12月16日
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    • 英文名

      X-a-gal

    • 保质期

      3年

    • 供应商

      上海谷研

    • 保存条件

      -20℃

    • 规格

    产品名称:X-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物
    有效期:3年

    溶解性:5mg/mLinDMF
    别名:5-溴-4-氯-3-吲哚-a-D-半乳糖苷
    英文名称:X-a-gal
    CAS:107021-38-5
    分子式:C14H15BrClNO6
    分子量:408.63
    储存条件:-20℃
    纯度:95%
    外观(性状):白色粉末
    单位:瓶
    产品信息: X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶(MEL1)的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活,MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色产物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。 x-α-gala-半乳糖苷酶显色底物用途: 1)α-半乳糖苷酶的显色底物,形成蓝色沉淀。在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays; 2)用于区分肠杆菌科内的不同菌种以及区分双歧杆菌和乳酸菌; 3)在组织化学中用于酶活性的检测; x-α-gala-半乳糖苷酶显色底物 储存液的配制及使用步骤: A)涂布于预制平板:溶解24mgX-α-gal于6mLDMF,终浓度为4mg/mL的溶液。 ①涂布200ul(15cm)或者100ul(10cm)X-α-gal储存液于预制平板上; ②放于37℃培养箱至液体被吸收(由于DMF挥发性低,最长可放4小时); ③将转化细菌或酵母涂于平板上,于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。 B)直接加入琼脂中:溶解60mgX-α-gal于3mLDMF,终浓度为20mg/mL的溶液。 ①将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃; ②往已冷却的培养基中直接加入2ml-10ml20mg/mlX-α-Gal储存液,混匀,快速倒平板。 外观:白色或灰白色结晶粉末,或者无色结晶; 溶解度(1%甲醇溶液):无色,清澈; 储存:-15°C避光避潮保存;x-α-galα-半乳糖苷酶显色底物  备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
    作用及原理:
    ⒈溶液I—溶菌液:
    溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。
    葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。
    EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
    ⒉溶液II-NaOH-SDS液:
    NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。
    但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
    X-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
    SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
    1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
    2)解聚细胞中的核蛋白。
    3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。

    产品细节图片1
    根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理,可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
    1.Nacl是常用的盐析材料之一,盐析即在高浓度Nacl溶液中,蛋白质析出的现象。原理如下
    1)Nacl溶液与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;
    2)Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出;
    2.不同浓度下DNA分子构象(三维结构)不同,不同的构象溶解度也不同。
    1)当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时,DNA溶解度最小,因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出;
    2)DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高;

    产品细节图片2
    3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液,使得蛋白质析出,而DNA溶解度较大,通过高速离心,取上清并去除沉淀,进而去除蛋白质。
    DNA沉淀剂:
    原则:不与DNA反应,对其无影响。
    1.纯乙醇(二倍体积比);效率高,需要放置的时间短,在公司用Kit提取的时候,没有放置直接进行下一步;确定是价格相对昂贵。
    2.95%乙醇,价格相对于纯乙醇便宜,但是会损失DNA;
    3.异丙醇(0.6倍体积);
    1)普通细胞上清液体,静止15-30min即可沉淀;
    2)对于含量低,或者组织(比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA),则最好在-20℃放置2h或者以上,
    本人提取肝脏组织DNA时候,最长时间放置了三天,对结果并无影响;上周提取细胞中cccDNA的时候,室温放置了15min,结果提出的DNA含量也挺高的,而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高,所以时间短点也可以,但是如果时间不是很着急,还是按照规定的时间来做比较保险。
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    X-α-gal α-半乳糖苷酶显色底物犬肿瘤坏死因子α酶联免疫试剂盒

    英文名称:Canine (dog) TNF-alpha ELISA Kit
    反应性:Canine (dog)
    样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
    检测范围:1-2200 pg/ml
    灵敏度:0.6 pg/ml
    检测目标:TNF-α
    应用:Sandwich ELISA 
     

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