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上海谷研
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100个/箱
单位:100个/箱
pp材质,由于比较薄,所以不建议高压灭菌,可能会导致变形。生化实验常用耗材。规格:13*5.5*2.5cm
作用及原理:
⒈溶液I—溶菌液:
溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II-NaOH-SDS液:
NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是稳定的。
但当pH>12或pH<3时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
加样槽在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1/L,加抽提液时,该系统的pH就高达12.6,因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS:SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取过程中,必须把它去除干净,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA时)受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理,可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一,盐析即在高浓度Nacl溶液中,蛋白质析出的现象。原理如下
(1)Nacl溶液与蛋白质争夺水分子,破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜;
(2)Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷,从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出;
2.不同浓度下DNA分子构象(三维结构)不同,不同的构象溶解度也不同。
(1)当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时,DNA溶解度最小,因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出;
(2)DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高;
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液,使得蛋白质析出,而DNA溶解度较大,通过高速离心,取上清并去除沉淀,进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂:
原则:不与DNA反应,对其无影响。
1.纯乙醇(二倍体积比);效率高,需要放置的时间短,在公司用Kit提取的时候,没有放置直接进行下一步;确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇,价格相对于纯乙醇便宜,但是会损失DNA;
3.异丙醇(0.6倍体积);
(1)普通细胞上清液体,静止15-30min即可沉淀;
(2)对于含量低,或者组织(比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA),则最好在-20℃放置2h或者以上,
本人提取肝脏组织DNA时候,最长时间放置了三天,对结果并无影响;上周提取细胞中cccDNA的时候,室温放置了15min,结果提出的DNA含量也挺高的,而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高,所以时间短点也可以,但是如果时间不是很着急,还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品:
BCL2L14 Polyclonal Antibody 种属 Bacillus│horneckiae英文: BCL2L14 Polyclonal Antibody 模式菌株no
ALG12 Polyclonal Antibody 种属 Tenacibaculum│mesophilum英文: ALG12 Polyclonal Antibody 模式菌株no
CSH1 Polyclonal Antibody 种属 Vibrio│splendidus英文: CSH1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
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SKIV2L2 Polyclonal Antibody 种属 Gallaecimonas│xiamenensis英文: SKIV2L2 Polyclonal Antibody应用领域潜在有机污染物降解菌/分离自PAH富集菌群
RHOT1 Polyclonal Antibody 种属 Arthrobacter│mysorens英文: RHOT1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
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LCK Polyclonal Antibody 种属 Pseudomonas│geniculata英文: LCK Polyclonal Antibody 模式菌株no
TRIM23 Polyclonal Antibody 种属 Rhodovulum│sp.英文: TRIM23 Polyclonal Antibody应用领域新种鉴定
IFRD1 Polyclonal Antibody 种属 Ketogulonicigenium│sp.英文: IFRD1 Polyclonal Antibody应用领域大洋细菌,新种鉴定
ART5 Polyclonal Antibody 种属 Antarctobacter│heliothermus英文: ART5 Polyclonal Antibody 模式菌株yes
PBRM1 Polyclonal Antibody 种属 Brevibacterium│celere英文: PBRM1 Polyclonal Antibody应用领域 模式菌株;
PRNP Polyclonal Antibody 种属 Agrococcus│jenensis英文: PRNP Polyclonal Antibody应用领域 模式菌株
NDC80 Polyclonal Antibody 种属 Vibrio│gigantis英文: NDC80 Polyclonal Antibody 模式菌株no
PSMA6 Polyclonal Antibody 种属 Labrenzia│alexandrii英文: PSMA6 Polyclonal Antibody 模式菌株no
WASL Polyclonal Antibody 种属 Anoxybacillus│sp.英文: WASL Polyclonal Antibody 模式菌株no
加样槽人瘦素elisa检测试剂盒
英文名称:Human Leptin ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:7 pg/ml
检测目标:Leptin
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验明书上推荐的洗涤次数清洗,随意改变洗涤的次数会影响实验的精确性。 贮液瓶 为避免污染,不同的试剂使用不同的贮液瓶。一些试剂或样本很容易被污染(比如唾液、氧化剂等),请参考说明书操作。必要时候采取一些预防措施保护溶液。另外,要保证盛放试剂或洗液的加样槽的清洁度,避免造成污染。 封板覆膜 使用过的封板覆膜可能含有上一步实验残留的试剂,如果重复使用会造成孔板污染,从而导致精确性低。建议每一次孵育使用新的封板覆膜。
底部将溶液混匀后,立刻倒入玻璃夹缝中,液面与玻璃上边缘齐平。然后再慢慢插入梳子,静置约20min。烧杯中剩下的溶液倾斜放置直到溶液凝固。(此状态可以用塑料薄膜包起来放入冰箱过夜)。(9) 小心拔出梳子以后,用注射器针头(剪平尖部)吸取梳子齿形成的加样槽中的水,并修平加样槽底部的胶面。(10)选取几个形态好的加样槽,在一张纸上做好对应的标记,用微量移液器在侧面的一个加样槽中加入20μl 蛋白分子量标准Marker,其它槽中加入10~20μl自己制作的样品。(11)加完样品后,再用微量移液器吸取电泳
ml凝胶溶液和1.2ml APS相混合,不要有气泡。溶液必须混匀,不要引进氧气。9.含有凝胶溶液得容器放在加样槽的后面玻璃板上,这样凝胶溶液可以沿着加样槽从玻璃板流下而没有气泡,分离胶被加到标记处。10. 迅速用去离子水覆盖凝胶溶液,以利于聚合并使表面平坦。在凝胶一端用一巴斯德移液管防止搅动凝胶溶液,并使水在凝胶表面均匀地分层。60分钟后,凝胶可以用于SDS-PAGE电泳。2)加样1.用滤纸条去除凝胶表面的去离子水。2.将凝胶“三明治”放到电极装置上(旋钮冲外,尖角向上):首先将凝胶“三明治”放到电极
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