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- 2025年12月11日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
47
- 英文名：
2×SYBRGreenPCRMastermix
- 保质期：
有效期1年
- 供应商：
上海谷研
- 保存条件：
-20℃，避光
- 规格：
盒
别名:实时荧光定量PCR试剂盒;QuantitativeReal-timePCRKit;RealtimePCRKit；RT-PCRKit
英文名称:2×SYBRGreenPCRMastermix
储存条件:-20℃，避光，有效期1年
单位:盒
使用方法：根据用量取PCR反应体系1/2体积该预混液，加入相同体积含引物和模板的水溶液混匀即可。总体积即为PCR总体系，引物和模板用量可根据此体系计算。 产品简介：本产品为应用SYBRGreenⅠ染料进行RealtimePCR扩增反应的高效预混系统。该预混系统提供了经过优化的缓冲液、dNTP、HotStartTaqDNA聚合酶、SYBRGreenI染料和MgCl2，使用者只需加入适量的引物、模板和水，即可进行荧光定量PCR检测。该预混系统中的优化缓冲液和HotStartTaqDNA聚合酶等可大大提高PCR产物的灵敏度和特异性。RealtimePCRMasterMix采用高效HotStartTaqDNA聚合酶，使PCR反应具有更高灵敏度和特异性。本产品可用于荧光PCR检测，获得灵敏、准确且可靠的结果。可适合任意荧光定量PCR仪，如ABI7000/7700/7900HT/7300/7500RealtimePCRSystem、FTC2000、lightcycler等。 产品特性：高特异性：本产品采用热启动DNA聚合酶，90℃以上2min后具有扩增活性，可大大提高PCR产物的特异性。灵敏度：本产品包含的优化的缓冲液可检测低拷贝数的模板，且重复性好。高适用性：本产品可适用于任意荧光定量PCR仪。应用实例：模版：提取RNA，反转录成cDNA，模版稀释倍数102﹑103﹑104﹑105，设计的引物扩增的目的片段长度是125bp。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
2×SYBR Green PCR Mastermix 在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；
3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
CLDN2 Polyclonal Antibody 种属 :Bacillus│horikoshii英文: CLDN2 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
ASMTL Polyclonal Antibody 种属 :Bacillus│simplex英文: ASMTL Polyclonal Antibody 模式菌株:no
SOX6 Polyclonal Antibody 种属 :Comamonas│sp.英文: SOX6 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
PDE6B Polyclonal Antibody 种属 :Microbacterium│lacticum英文: PDE6B Polyclonal Antibody 模式菌株:no
CLDND1 Polyclonal Antibody 种属 :Achromobacter│insolitus英文: CLDND1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
IKZF1 Polyclonal Antibody 种属 :Virgibacillus│marismortui英文: IKZF1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
FOXM1 Polyclonal Antibody 种属 :Staphylococcus│sciuri英文: FOXM1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
RBMY1A1 Polyclonal Antibody 种属 :Halobacillus│trueperi英文: RBMY1A1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
RASSF7 Polyclonal Antibody 种属 :Sphingomonas│xenophaga英文: RASSF7 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
MRE11A Polyclonal Antibody 种属 :Geobacillus│sp.英文: MRE11A Polyclonal Antibody 模式菌株:no
TPI1 Polyclonal Antibody 种属 :Leucobacter│chromiireducens英文: TPI1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
DPP8 Polyclonal Antibody 种属 :Pseudomonas│monteilii英文: DPP8 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
AP2A2 Polyclonal Antibody 种属 :Rhodococcus│wratislaviensis英文: AP2A2 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
ATPIF1 Polyclonal Antibody 种属 :Microbacterium│arabinogalactanolyticum英文: ATPIF1 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
CKAP4 Polyclonal Antibody 种属 :Paenibacillus│panacisoli英文: CKAP4 Polyclonal Antibody培养方法
INTS4 Polyclonal Antibody 种属 :Chitinophaga│ginsengisegetis英文: INTS4 Polyclonal Antibody 模式菌株:no
2×SYBR Green PCR Mastermix 人癌胚抗原相关细胞粘附分子6elisa检测试剂盒
英文名称:Human CEACAM6 ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:150 pg/ml
检测目标:CEACAM6/CD66c
应用:Sandwich ELISA
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文献和实验SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
REAL TIME PCR WITH SYBR GREEN I 建议PROTOCOL
1、反应体系 25ulCocktail 20 ul: Primer FP 1 ul + Primer RP 1u + 2 * SYBR GREEN I MIX 12.5 + H2O 5.5 ul cDNA 5 ul2、Primer 浓度，需要摸索，从200nM到700nm等，设置不同浓度。3、每个引物浓度，从well 1到12设置4个样本，阳性cDNA 1和2，NTC以及H2O，做triplicate。4、若用ABI7000或7700，所有的PCR条件可设置成一致的，减少麻烦，当然，引物
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
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