兔抗狗IgG-HRP

免疫球蛋白：

产品参数：

产品名称	兔抗狗IgG-HRP
英文名称	Rabbit anti-Dog IgG/HRP
货号	BH-DB1077

产品名称：兔抗狗IgG-HRP
英文名称: Rabbit anti-Dog IgG/HRP
储存条件: -20°C
单位: 瓶
酶标记抗体，是一类广泛用于免疫学、分子生物学及临床医学的各个分支学科中的特异、敏感和安全的免疫化学制剂。目前较为常用的是将辣根过氧化物酶(HRP)，经过钠氧化而标记在抗体IgG分子上，而制成HRP—抗体结合物。公司向用户提供的各类酶标物，均根据本公司建立的改良过钠氧化法标记而成。每种成品已加入一定浓度的BSA作为稳定剂。产品的工作浓度根据方法不同而别，用前最好-20℃冻存，避免反复化冻。
应用范围：
抗原决定族的抗原性分析鉴定，各种抗原、抗体的定量、定性及定位分析测定等。
工作中易产生的问题：
2.用抗血清不纯化，或纯化程度太低的抗体包被，则阳性值较小，或没有阳性梯度。
3.封闭不好或标记物过浓可产生对照较高。
主要性能：
每支0.1ml液体，内含有HRP约200μg/支，IgG约含400μg/支，BSA300μg/支，－20℃保存，稳定一年。4℃保存约3～6个月，1:10稀释，4℃可30天左右。稀释液为：pH7.4PBST。
工作效价：
直接ELISA法：1:500~1:1000，用TMB作底物(OD450nm)P/N＝2.5～3.0为阳性。
免疫印迹法：1:200～400，免疫组化：1:20～40，斑点免疫1:200~400。
备注：产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。
注意事项： 
 1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
 2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
 3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。
 4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤：
根据使用量，取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF，使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100 万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品： 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。
温馨提示：
    工作液与浓缩液选择的技巧，以及各自的优势。
1，工作液的优势：工作液操作方便，降低实验操作步骤，对于要求无菌的实验，降低染菌风险。
2，浓缩液的优势：浓缩液成本相对较低，实验范围更广，对于不要求无菌的实验，可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高，保存更加稳定。
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