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检测细菌污染
荧光定量PCR法
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120T
序号 | 组分名称 | 装量 | 管数 | 主要成份 |
1 | PCR反应液 | 10 ml | 10 | 含引物、Taq酶、buffer、dNTP、MgCl2 |
2 | 阳性对照 | 1ml | 1 | 细菌培养物 |
3 | 阴性对照 | 1ml | 1 | Nuclease-free 水 |
4 | 标准品 | 100 μl | 1 | 重组质粒(108拷贝/μl) |
5 | 1×TE buffer | 1ml | 1 | Tris-HCl和EDTA |
6 | 参比染料 | 1ml | 1 | ROX Reference Dye |
编号 | 1×TE buffer用量 | 标准品用量 | 拷贝数 | |||
1 | 1` | 9 μl | 9 μl | 1 μl标准品 | 1 μl标准品 | 107 copies/μl |
2 | 2` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品1 | 1 μl样品1` | 106 copies/μl |
3 | 3` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品2 | 1 μl样品2` | 105 copies/μl |
4 | 4` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品3 | 1 μl样品3` | 104 copies/μl |
5 | 5` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品4 | 1 μl样品4` | 103 copies/μl |
6 | 6` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品5 | 1 μl样品5` | 102 copies/μl |
组分名称 | 加样量 |
PCR反应液 | 18.5 μl |
参比染料 | 0.5 μl |
模板 | 1 μl |
总体积 | 20 μl |
组分名称 | 加样量 |
PCR反应液 | 17.5 μl |
参比染料 | 0.5 μl |
阳性对照 | 1 μl |
待检测样品 | 1 μl |
总体积 | 20 μl |
阶段 内容 | Stage1 (预变性) |
Stage2 (PCR反应) |
Stage3 (扩增产物熔解曲线) |
|||||
温度 | 95℃ | 95℃ | 58℃ | 72℃ | 95℃ | 60℃ | 95℃ | 60℃ |
时间 | 10min | 20s | 30s | 30s | 15s | 1min | 15s | 15s |
循环数 | 1 | 40 | 1 |
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