Tris-Gly转膜液（25×)

重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性

mM Gly-NaOH(pH 9~12)，所有缓冲液均为 25℃ 下配制。底物在 25℃ 温浴 10 分钟后，开始测活。 2. pH 稳定性的研究 取活性为 10 mg/ml 纯酶液，分别在 pH 3~12 缓冲液中稀释 10 倍，在 25℃ 下温浴 2 h，取样品测定酶活，以水浴前酶液初始活性作为 100%，计算残余活性。缓冲液依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25 mM Gly-NaOH (pH 9~12)，所有缓冲

WESTERN BLOT PROTOCOLS

Buffer Salt Tween20 ，1L) 10×TBS 100ml Tween 1ml 蒸馏水定容1L 4、10×转膜液(1L) Tris碱 30.3g Gly (甘氨酸) 150.1g 加水定容至1L 用时取100 mL ,加甲醇200 mL ,在定容1L 即为1 × 5、4×Loading buffer 0.5M Tris-HCl (pH 6.8) 2.5ml

自我总结的Westen Blot步骤，简单实用！

的胶板放入装有去离子水的饭盒中，防止胶中的水分蒸发，发生缩胶现象。 电泳液和转膜液的配制 1.  电泳液：Gly15.0g，Tris-base3.02g，SDS1g，1000ml 去离子水，室温保存 2.  转膜液：Gly14.4g，Tris-base3.00g，甲醇100ml，900ml去离子水，4℃保存 蛋白质样本的处理 1.  从-80℃冰箱中取出提好的蛋白质，按照算好的蛋白，ripa,loading将蛋白稀释到同一个体积。（此操作过程在冰域中进行） 蛋白质的体积 X= 40