CCK8细胞增值与毒性检测试剂盒

一. 实验材料及试剂

96 孔板、CO2培养箱、酒精灯、移液*、酶标仪等；细胞、CCK8等。

二、实验内容

取生长状态良好的对数生长期细胞，每孔按 4×103个接种至 96 孔板中，每组设置8个复孔，置于细胞培养箱中培养，待细胞贴壁后转染相应质粒后。继续培养 48h 后，弃含药培养基，每孔加入新鲜配制的含 10ｕL的毒性检测液CCK8，置于培养箱中继续培养 4h 后，用酶标仪测波长为450 nm的OD值。实验重复 3 次， 取实验结果的平均值作为最终实验结果。按公式计算生长抑制率＝[(对照组 OD－实验组 OD)/对照组 OD]  ×100%，以分组为横坐标，生长抑制率为纵坐标，绘制细胞生长抑制率柱状图。

当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1000 个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500 个/孔(100μl培养基)。酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。

三、注意事项

CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。金属对CCK-8显色有影响：如果终浓度是10 mM的话，将会100%抑制。悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。