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- 翌圣生物（Yeasen）
- 11370ES24
- 上海
- 2026年04月02日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
5 × Frag/Prime Buffer
- 保质期：
效期1年
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
-20°C存放
- 规格：
24T
产品描述
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® (Yeasen: Cat#12251)或者Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI® (Yeasen: Cat#13332)，替代其中的Frag/Prime buffer使用，用于RNA的片段化和一链cRNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA，也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12251或Cat#13332中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA，没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free H2O中，可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
产品组分
| 组分编号和名称 |
11370ES08 |
11370ES24 |
11370ES96 |
||
| 11370-A |
|
5×RT/Frag Buffer |
40 μL |
120 μL |
480 μL |
| 11370-B |
|
Random Primer |
8 μL |
24 μL |
96 μL |
运输与保存方法
干冰运输，-20°C存放，效期1年。
注意事项
1. 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. Input RNA请溶于Nuclease free H2O，避免Mg2+的存在干扰片段化效果；Input RNA最大投入体积为11 μL，在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
3. 本产品仅作科研用途！
使用方法
当Input RNA是不需要片段化时，请选择方案A；当Input RNA是需要片段化处理时，请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理，可结合Cat#12251或Cat#13332试剂按照表1，直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
| 名称 |
体积（μL） |
| Input RNA |
11 |
| 5×RT/Frag Buffer |
5 |
| Random Primer |
1 |
| Strand Specificity Reagent |
6 |
| 1st Strand Enzyme Mix |
2 |
| Total |
25 |
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
| 温度 |
时间 |
| 热盖 105°C |
On |
| 25°C |
10 min |
| 42°C |
15 min |
| 70°C |
15 min |
| 4°C |
Hold |
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理，可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
| 名称 |
体积（μL） |
| Input RNA |
11 |
| 5×RT/Frag Buffer |
5 |
| Random Primer |
1 |
| Total |
17 |
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，根据Input RNA的完整度和实验目的，参考Cat#12251或Cat#13332说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成，按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
| 名称 |
体积（μL） |
| Fragmented RNA |
17 |
| Strand Specificity Reagent |
6 |
| 1st Strand Enzyme Mix |
2 |
| Total |
25 |
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底，按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
相关产品
| 产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
| 12251ES08//24/96 |
8/24/96 T |
3272.00/ 8372.00/ 28772.00 |
|
| 13332ES08/16//96 |
8/16/96 T |
3152.00/ 8752.00/ 36852.00 |
HB200417
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文献和实验DETECTION OF ß-GALACTOSIDASE AND ALKALINE PHOSPHATASE ACTIVITIES IN TISSUE
reaction buffer can be stored for at least one year at room temperature in foil-covered container. X-gal stock(40X) 40 mg/ml X-gal in dimethylformamide Store at -200 C in foil covered glass container. Rinse many times in PBS
细胞染色buffer(或含1%BSA的PBS)重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项 在抗体使用之前，快速离心一下，使之聚集到管的底部。 荧光标记的抗体应该避光4℃保存，不要冷冻。 当染色的时候，固定或延迟分析可能降低某些抗体的荧光信号。为了得到更好的结果，染色后应该马上分析。 二、细胞内细胞因子染色步骤 细胞准备 1.1 收集细胞。经刺激和阻断处理的细胞（具体处理方案请参考文献进行），加细胞染色buffer（或含1%BSA的PBS）制成单细胞悬液，调整细胞浓度约为1 × 107/mL
一、样本准备 收集细胞，200 目筛网过滤，收集滤液，300g 离心 5 min，弃上清。 向细胞中加入适量细胞染色 buffer(或含1%BSA的PBS)，用移液枪轻轻吹打细胞重悬。 二、细胞计数 用血球计数板或其他仪器对悬液进行计数后，调整细胞浓度约为 1 × 107/mL。 三、设置实验分组 根据实验设计，设置实验分组，每管加入 100μL 细胞悬液。 四、封闭 Fc 受体 封闭 Fc 受体能减少染色过程中的非特异性染色。 小鼠中，纯化的 CD16/CD32 单抗
