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2 × Frag/Prime
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2 × Frag/Prime Buffer
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1年
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
-20
8T
产品信息
产品名称
产品编号
规格
价格(元)
11377ES08
8 T
102
11377ES24
24 T
232
11377ES96
96 T
632
产品描述
本产品衔接Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for Illumina® (Yeasen: Cat#12251)或者Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit for MGI® (Yeasen: Cat#13332),替代其中的Frag/Prime buffer使用,用于RNA的片段化和一链cDNA合成步骤。Input RNA可以是total RNA,也可以是mRNA纯化的产物、rRNA去除的产物等。由于在Cat#12251或Cat#13332中直接使用1×Frag/Prime Buffer去洗脱mRNA纯化或rRNA去除操作中所得的RNA,没有额外的体积用于添加含RNA的溶液。若Input RNA已经溶解于Nuclease free ddH2O中,可选择本产品进行RNA片段化或一链cDNA合成反应。
产品组分
组分编号
组分名称
11377-A
68 μL
204 μL
816 μL
运输与保存方法
干冰运输。-20 °C存放,有效期一年。
注意事项
1.请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
2. Input RNA请溶于Nuclease free ddH2O,避免Mg2+的存在干扰片段化效果;Input RNA最大投入体积为8.5 μL,在进行洗脱时请注意洗脱体积的选择。
3. 本产品仅作科研用途!为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
使用方法
当Input RNA不需要片段化处理时,请选择方案A;当Input RNA需要片段化处理时,请选择方案B。
A1. 若Input RNA无需片段化处理,可结合Cat#12251或Cat#13332试剂,按照表1直接配制第一链cDNA合成反应体系。
表1 直接进行第一链cDNA合成反应体系
名称
体积 (μL)
Input RNA
8.5
2×Frag/Prime Buffer
Strand Specificity Reagent
6
1st Strand Enzyme Mix
2
Total
25
A2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
表2 第一链cDNA合成反应程序
温度
时间
热盖 105 °C
On
25 °C
10 min
42 °C
15 min
70 °C
4 °C
Hold
B1. 若Input RNA需要进行片段化处理,可按照3配制片段化体系进行RNA片段化。
表3 片段化反应体系
17
B2. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,根据Input RNA的完整度和实验目的,参考Cat#12251或Cat#13332说明书设置合适的片段化条件。
B3. 片段化产物进行一链cDNA合成,按照表4配制一链cDNA合成反应体系。
表4 第一链cDNA合成反应体系
Fragmented RNA
B4. 使用移液器轻轻吹打混匀,瞬离将反应液离心至管底,按照表2反应程序于PCR仪中进行一链合成反应。一链合成产物可衔接Cat#12251或Cat#13332进行后续反应。
HB220117
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