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S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒

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  • 上海一研
  • 进口、国产
  • 2025年07月12日
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      详见说明书

    • CAS号

      详见说明书

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      上海一研

    • 保存条件

      4°C保存

    • 规格

      100T/盒

    产品具有以下优点:
    1、原装进口抗体----高效、灵敏、特异
    2、规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
    3、先进的优化方案----重复性高,可靠性强
    4、购买本公司的S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒免费代测
    5、技术服务要求:专业,规范,高效
    6、适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
    7、可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
    8、可检测指标齐全:炎症因子、血管生成素、动脉粥样硬化因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
    9、经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,优秀的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果,是您可靠的合作伙伴。
    参数规格:
    产品名称  S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒
    规格:100T/盒

    特异性: 人
    标记方式: 3’—尾段标记
    保存条件: 4°C保存一年
    试剂盒内容:
    1.S-100A7寡核苷酸探针杂交液    2ml;
    2.预杂交液                     2ml;
    3.胃蛋白酶(×10;Pepsin)       2ml;
    4.封闭液                       5ml;
    5.生物素化鼠抗           5ml;
    6.SABC-POD                     5ml;
    7.生物素化过氧化物酶           5ml。
    产品细节图片1
    操作程序:
    注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
    1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
    2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
    3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
    4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
    5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
    6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
    7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
    8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
    9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
    10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
    11.滴加生物素化鼠抗37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
    13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
    14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
    15.必要时苏木素复染,充分水洗。
    16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
    试剂盒组份:
    5×Equilibration Buffer————750μl
    FITC-12-dUTP Labeling Mix———100 μl
    Recombinant TdT Enzyme—————20 μl
    Proteinase K (2 mg/ml)————40 μl
    DNase I (1 U/μl)———————5μl
    10×DNase I Buffer——————100 μl
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    S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒菌株类型:E.coli

    培养基:LB培养基
    生长条件:37 ℃,  有氧
    基因型:Tuner(DE3)pLysS感受态细胞基因型
    抗性:氯霉素
    质粒转化条件:42 ℃热激
    应用:蛋白表达
    诱导方法:IPTG
    菌株特点:
    Tuner系列菌株是LacZY去除的BL21突变菌株,这可以通过细胞培养来调节蛋白表达水平。lac通透酶(lacY)突变使得IPTG能够进入所有的细胞菌内。
    不像乳糖或者阿拉伯糖,IPTG是一个可以通过lac通透酶途径进入细胞内的诱导剂。这使得菌株可以使得IPTG的蛋白诱导具有IPTG的浓度依赖性。与 pET系列载体联合使用,可以使得蛋白表达从低表达水平到超高表达水平进行有效调节。蛋白表达水平低的情况下,目的蛋白可能会具有更好的可溶性和生理活 性。
    Tuner系列菌株的蛋白表达水平可以通过IPTG浓度进行精确的调节,具有严格的浓度依赖性。
    Tuner系列菌株还是lon和ompT蛋白酶缺陷型菌株。
    DE3是溶源性的 λDE3, 所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体,及其他T7启动子系列载体。
    含有pLSs质粒,pLySs质粒能够产生T7溶菌酶,可以有效降低目的基因的基础表达水平。pLySs质粒使得该菌株具有氯霉素抗性。pLySs质粒的起始复制位点是p15 Origin, 这使得该质粒能够和pUC-及pBR322-衍生的质粒互相共存。

     

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