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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
48
- 英文名:
Guinea Pig IL-1β ELISA Kit
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
详见说明书
- 规格:
瓶
| 产品名称 | Guinea Pig IL-1β ELISA Kit图片 |
| 英文名称 | Guinea Pig IL-1β ELISA Kit |
| 货号 | YS-D4183 |
中文名称:豚鼠白介素1β酶联免疫检测试剂盒
英文名称:Guinea Pig IL-1β ELISA Kit
反应性:Guinea Pig
样品类型:血清/血浆/细胞培养上清
检测范围:31-2000 pg/ml
灵敏度:6 pg/ml
使用方法:
1. 对于培养细胞样品
(1) 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF (CAT:AP02L014),使PMSF的终浓度为1 mM。
(2) 细胞裂解
对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1~2 s后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,按照6孔板每孔细胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混匀,充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,需分装成50~100万细胞/管,然后再裂解。具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(3) 充分裂解后,10000~14000 rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2. 对于组织样品
(1) 把组织剪切成细小的碎片;
(2) 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM;
(3) 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量,具体RIPA裂解液的使用量参照表2。
(4) 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,10000~14000rpm离心3~5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项:
1、本试剂为强烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同时,也会将基因组一并释放出来,造成细胞裂解液粘稠,此时可以直接加入蛋白上样缓冲液,煮沸再离心,离心后直接上样电泳;若想测定浓度,可入加少量SDS(1%),煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂,所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒,请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
2、如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物,随后离心取上清用于后续实验。
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