HRP标记生物素规格

产品名称：HRP标记生物素规格
英文名称: Biotin/HRP
储存条件: -20℃
单位: 瓶
其它:
公司公司研制的HRP标记生物素是采用进口生物素和高活性过氧化物酶HRP，采用本公司建立的标记技术，制成HRP-Biotin复合物，可广泛用于免疫病理、酶联免疫测定、基因探针及其他学科的放大检测系统。本产品每毫升含有1.5-2mg的BNHS和HRP，3mgBSA。
工作效价：
ELISA法：1：500～2000
组织化学：1：50～100
免疫印迹：1：200～400。
斑点免疫：1：200～400。
具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据所检测样本的抗
原及一抗效价优化而定。
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实验操作步骤：
HRP标记生物素规格是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。
细胞周期检测的原理：
PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。
常用的细胞染色方法有:
1.简单染色法,常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;
2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或)脱色以及番红复染四个过程;
3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;
4.吉姆萨染色法,吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;
5.细胞免疫荧光染色法,免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。
蛋白提取/定量
蛋白提取频道,提供蛋白提取实验用蛋白提取试剂盒，蛋白裂解液，蛋白浓度测定试剂盒等蛋白质实验用试剂及耗材。其中蛋白提取系列包括：植物蛋白提取试剂盒，细胞组织蛋白提取试剂盒，胞膜/细胞核蛋白提取试剂盒，全蛋白提取试剂盒等。

操作说明：
一，微孔酶标仪法
1.        完全溶解蛋白标准品，取10ml，加240ulPBS稀释至250ml ，使终浓度为0.2mg/ml。待测蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
2.        5×G250染色液使用前请颠倒3-5次混匀，取1ml  5×G250染色液，加入4ml双蒸水，混匀成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3.        将标准品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分别加到96孔板中，加PBS稀释液补足到20微升。
4.        将样品作适当稀释（zui好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
5.        各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液，室温放置3-5分钟。
6.        用酶标仪测定A595，或560-610nm之间的其它波长的吸光度。
7.        根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
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