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ELISA包被液(10x)

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  • 博湖
  • BH-DB025
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    • 英文名

      ELISA Coating Buffer,10×

    • 保质期

      有效期1年

    • 供应商

      上海博湖

    • 保存条件

      RT,

    • 规格

    产品参数:
    产品名称 ELISA包被液(10x
    英文名称 ELISA Coating Buffer,10×
    货号 BH-DB025
    产品名称:ELISA包被液(10x
    英文名称:ELISA Coating Buffer,10×

    储存条件:RT,有效期:1
    单位:
    本品10倍浓度的储存液,使用前可用去离子水稀释10倍,即成PH9.6的即用型工作液,用于ELISA(酶联免疫吸附实验)中酶标板的抗原或抗体的包被。使用时取适量包被缓冲液将抗原或抗体溶液稀释至相应包被的浓度,在ELISA酶标板每个反应孔中加入100ul4℃包被过夜。

    注意事项: 
     1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
     2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
     3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
     4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
     5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作

    免疫球蛋白:

     
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    操作步骤
    根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
    1、样品前处理:
    a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
    b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
    c)对于组织样品: 把组织剪切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
    2、后处理:
    将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。

    温馨提示:
        工作液与浓缩液选择的技巧,以及各自的优势。
    1,工作液的优势:工作液操作方便,降低实验操作步骤,对于要求无菌的实验,降低染菌风险。
    2,浓缩液的优势:浓缩液成本相对较低,实验范围更广,对于不要求无菌的实验,可以进行多种浓度的实验分析以及比较。而且由于浓度高,保存更加稳定。

     

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