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胞浆蛋白提取试剂盒

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  • 博湖
  • BH-DB006
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      有效期1年

    • 供应商

      上海博湖

    • 保存条件

      储存条件:-20℃,避光,有效期:至少1年

    • 规格

    产品细节图片1
    产品名称:胞浆蛋白提取试剂盒
    储存条件:-20℃,避光,有效期:至少1

    单位:
    胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为温和,可获得蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。
    操作方法:
    1、组织总蛋白的提取
    1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;
    称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;
    将组织匀浆液移入1.5mlEP管中,4 oC 12000g离心30min
    吸取上清至新的管中;
    进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
    (提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
    2、细胞总蛋白的提取
    裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml
    贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,
    将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
    悬浮细胞:4 oC 400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,
    涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;
    裂解完毕之后,将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min
    将上清移入新的EP管中;
    进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
    (提取好的蛋白建议保存于-80 oC,即用即取,避免反复冻融,避免长时间储存。)
    产品名称 胞浆蛋白提取试剂盒
    英文名称  
    货号 BH-DB006
    操作步骤:
    Ⅰ 实体组织蛋白的提取
     1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
    2.  每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
    3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
    4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
    5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
    Ⅱ 培养细胞蛋白提取
    1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
    2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
    3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
    4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
            细胞数量         Lysis Buffer加入量
            107         0.5 mL~1 mL
            5×106         0.2 mL~0.5 mL
    5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
    6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
    7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

    固定液的应用:
    1.单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以pH7 2~7 4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封…
    1.单纯固定液
    (1)4%中性甲醛固定液:zui常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是,中性甲醛是以 pH 7.2~7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不 超过一个月。
    (2)乙醇固定液:使用时以80%~95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,如果用于证明尿酸结晶和保存糖原,可用100%乙醇固定组织。
    (3)4%的多:主要用于培养细胞的固定。
    2.混合固定液
    (1)乙醇一甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
    (3)Bouin固定液:特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。
    (4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,特别适合于固定外膜致密的组织,亦适用于糖原及尼氏小体的固定。
    (5)Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清晰,但成本较昂贵且需特殊处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效

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    磷酸化ATR抗体  Anti-phospho-ATR   WB IHC-P
    细胞核重定位及纺锤体检查点蛋白AMN1抗体  Anti-AMN1  WB IHC-P
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    磷酸化相似肿瘤抑制基因HUGL抗体  Anti-phospho-LLGL1 + LLGL2  WB IHC-P
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    瘦素抗体  Anti-Leptin  WB IHC-P
    乳腺肿瘤自身抗原抗体LMO4抗体  Anti-LMO4  WB IHC-P
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    细孔柱层析硅胶(100-200目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:100-200目,层析用 小鼠血管紧张素原(aGT)ELISA检测试剂盒Mouseangiotensinogen,aGTELISAKit 96T/48T
    细孔柱层析硅胶(300-400目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:300-400目,层析用 小鼠血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒 ,英文名: aGT ELISA Kit
    大孔柱层析硅胶(20-60目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:20-60目,层析用 小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA检测试剂盒MouseAngiotensinconveingenzyme,ACEELISAKit 96T/48T
    大孔柱层析硅胶(100-200目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:100-200目,层析用 小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒 ,英文名: ACE ELISA Kit
    大孔柱层析硅胶(300-400目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:300-400目,层析用 小鼠血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA试剂盒 ,英文名: ACE2 ELISA Kit
    硅酸(>98%,BC)  Silicic acid hydrate  质量规格:>98%,BC 小鼠血管紧张素转换酶(ACE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
    一氧化硅(>99%,BR)  Silicon monoxide  质量规格:>99%,BR 小鼠血管内皮钙黏蛋白(CDH5)ELISA试剂盒 ,英文名: CDH5 ELISA Kit
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    小鼠血管紧张素转化酶(ACE)ELISA试剂盒 ,英文名: ACE ELISA Kit 大孔柱层析硅胶(100-200目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:100-200目,层析用
    小鼠血管紧张素转化酶2(ACE2)ELISA试剂盒 ,英文名: ACE2 ELISA Kit 大孔柱层析硅胶(300-400目,FCP Grade)  Silica gel for column chromatography  质量规格:300-400目,层析用
    小鼠血管紧张素转换酶(ACE)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 硅酸(>98%,BC)  Silicic acid hydrate  质量规格:>98%,BC
    胞浆蛋白提取试剂盒Mousecatecholamine,CAELISA试剂盒小鼠儿茶酚胺(CA)ELISA试剂盒规格:96T/48T 木犀草素OβD葡萄糖苷 HPLC≥98% 10mg
    小鼠血清总补体(CH50)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 阿特拉津 HPLC≥97% 200mg
    Rat dopamine D2 receptor (D2R) ELISA Kit 大鼠多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒 表丁香脂素 HPLC≥95% 5mg
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    荧光或共聚焦显微镜制片封片处理液(荧光稳定、永久保存)5/20毫升 十七酸 GC≥98% 20mg
    MouseIerleukin18,IL-18ELISAKit小鼠白介素18(IL-18)ELISA试剂盒规格:96T/48T L硒代胱氨酸 HPLC≥98% 20mg
    小鼠血清素/血清胺(ST)ELISA试剂盒 ,英文名: ST ELISA Kit 香菇多糖 UV≥98%,鉴别 20mg
    小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)ELISA检测试剂盒MousecyclophilinA,CyPAELISAKit 96T/48T 盐酸利多卡因? HPLC≥98% 100mg
    人基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)试剂盒 Human Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit  GC≥98% 250mg
     

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