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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
35
- 英文名：
Recombinant Human BMP-4
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
2μg
实验报告：
一、重组人BMP-4说明书分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：重组人BMP-4说明书
英文名称：Recombinant Human BMP-4
产品规格：2μg
发货周期：1～3天
本品为大肠杆菌重组表达的人BMP-4（RecombinantHumanBMP-4），具有以下用途
1）作为分子量标准(Western,ELISA)用于研究分泌型BMP-4；
2）制备单体BMP-4抗体；
3）还原型SDS-PAGE中作为分子量标准用于检测分泌型BMP-4。
骨形态发生蛋白4（BoneMorphogeneticProtein4，BMP-4）是BMP家族蛋白的一种，同属于转化生长因子β（TGF-beta）家族。已发现超过13种BMPs，在肺和肾脏组织，及正常和癌变前列腺组织中都有发现。BMPs软骨及骨生成过程中发挥重要作用，并参与多种生物学反应，如调节细胞增殖、分化及迁移等。此外,该蛋白在动物个体发育及人（Homosapiens）肿瘤的发生、发展过程中也扮演着重要角色。许多骨病的发生都会伴随着BMP-4表达水平的下降，其中包括遗传性疾病进行性骨化性纤维发育不良（FibrodysplasiaOssificansProgressiva）。
来源Escherichiacoli.
分子量约13.3kDa，非糖基化多肽链，单体，含117个氨基酸
纯度>95%bySDSPAGEandHPLC
外观无菌，白色冻干粉
成分0.2μm过滤除菌，溶液成分50mMNa2CO3,5mMDTT,pH11.0
内毒素含量通过LAL方法检测，内毒素含量低于1EU/μgrHuBMP-4
使用方法
1）本品低温取出回温至室温，开瓶前先短暂离心以保证冻干粉皆在瓶底。
2）加入适量无菌ddH2O溶解，使其母液浓度为0.1-1.0mg/ml。母液分装成单次用量，于≤-20℃保存。
【注】储存液2-8℃保存一周左右。长期保存需储存在-20℃或-70℃，避免反复冻融。
3）使用前，用适当的缓冲液进一步稀释到工作浓度。工作液需现配现用。
储存条件-20℃，有效期12个月
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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细胞二酰甘油酰转移酶Diacylglycerolacyltransferase；DGAT活性光度法定量检测试剂盒 免疫测定
细胞P300/CBP组蛋白酰转移酶P300/CBPHAT活性光度法定量检测试剂盒 免疫测定
真菌/酵母角鲨环酶squaleneepoxidase活性光度法定量检测试剂盒 免疫测定
细胞N马来酰亚敏感性融合蛋白ATP酶NSFATPase活性光度法定量检测试剂盒 免疫测定
植物脱酶激酶pyruvatedehydrogenasekinase活性光度法定量检测试剂盒 免疫测定
大鼠细胞周期素D3(Cyclin D3)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Rat Cyclin D3 ELISA Kit
大鼠细胞周期素D2(Cyclin D2)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Rat Cyclin D2 ELISA Kit
大鼠细胞周期素D1(Cyclin D1)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Rat Cyclin D1 ELISA Kit
大鼠髓脂蛋白（MBP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Rat MBP ELISA Kit
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大鼠前列腺性酶（PAP)试剂盒,ELISA分析检测试剂盒 Rat PAP ELISA Kit
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重组人BMP-4说明书 19号染色体开放阅读框54抗体 AcSDKP ELISA Kit N-酰-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯(AcSDKP)ELISA试剂盒
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培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
一、重组人BMP-4说明书分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
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1）作为分子量标准(Western,ELISA)用于研究分泌型BMP-4；
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3）还原型SDS-PAGE中作为分子量标准用于检测分泌型BMP-4。
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3）使用前，用适当的缓冲液进一步稀释到工作浓度。工作液需现配现用。
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1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
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3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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