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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
49
- 英文名:
Carnoy Fixative Solution
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
250mL
英文名称:Carnoy Fixative Solution
产品规格:250mL
发货周期:1~3天
Carnoy固定液是由乙醇、氯仿和乙酸,按照631的比例混合而来的混合型固定液。该液渗透快速,固定只需1-2小时。固定后可以直接用95%乙醇脱水,固定核酸和糖原的效果很好。Carnoy固定液是组织化学最常用的固定液之一。
产品特点
1.适用于一般植物组织和细胞的固定,常用于根尖,花药压片及子房石蜡切片等组织的固定。
2.有极快的渗透力,根尖材料固定15-20分钟即可,花药则需1小时左右。固定时间一般只需1-2小时,最多不超过24小时。
储存条件常温运输及保存,保存期为一年。
使用方法
1.标本修块,置入本产品内固定1~2小时(根据样品材料、大小不同,固定时间可能会有较大差异),固定时间一般最多不超过24小时。
2.固定后用95%乙醇洗涤。如果材料不是立即使用,需转入70%酒精中保存。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:1.Carnoy固定液价格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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指直接装填到色谱柱中作为固定相的具有活性的多孔性固体物质。固体固定相大体可分为三类: 第一类是吸附剂。如:分子筛、硅胶、活性炭、氧化铝等; 第二类是高分子聚合物。如国内的GDX型高分子多孔微球,国外Porapak系列等; 第三类是化学键合固定相。在气相色谱中,通常是将固定液涂敷在载体表面上。采用化学键合固定相分析极性或非极性物质通常都能够得到对称峰,柱效很高,固定相的热稳定性也有所改善。 一般是一种高沸点的有机物的液膜,通过对不同
固定液 fixative, fixative solution
。渗透性很弱。另外不适宜用于细胞化学和组织化学方面的研究。在把材料放入固定液中后,固定液内外产生浓度梯度,这对保持形态是不利的。为了防止这一缺点,可把材料作成小块和薄片,同时并混以醋酸或酒精等,以提高对原生质的通透性。但是这类固定液一般具有溶解脂类的性质,会促使细胞内部结构发生变化,或因固定液急剧浸入细胞,使细胞内低分子物质流失,因此这与形态的保存是矛盾的。用固定液对材料进行固定,一般容易引起原生质收缩。各种固定液均各有其本身的缺点,对材料的固定状态也每有不同,但如果根据不同目的采取适当的处方和调整
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