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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Mouse)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Mouse)
英文名称：Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Mouse)
产品规格：100次|300次
发货周期：1～3天
储存条件冷藏（2-8℃）
概述
免疫荧光检测试剂盒系列用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时，就可以使用免疫荧光检测试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。
本试剂盒含有Cy3标记的山羊抗小鼠IgG(H+L)抗体，可以用于检测小鼠来源的相应一抗，在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下可以观察到鲜艳的红色。
特点
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液，可以使荧光更加持久。操作简便，灵敏度高。
组份
封闭液；山羊抗小鼠Cy3标记二抗；免疫荧光染色二抗稀释液；抗荧光淬灭封片液
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．Cy3免疫荧光检测试剂盒(小鼠)说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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文献和实验konglingrufeng 之前实验设计 A组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+培养基 B组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+实验诱导剂+培养基 C组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+阳性诱导剂+实验诱导剂+培养基 D组 小鼠成骨前体细胞（MC3T3-E1)+培养基 诱导相同天数后在免疫荧光结合共聚焦显微镜技术下，半定量测定OPG/RANKL表达，差异有统计学意义
在免疫荧光染色过程中单染和共染是常用的两种方式，除此之外我们还可能会用到远红外进行染色标记。这相对于前两者实验操作上处理方法是一致的，唯独在样品处理上有所不同，而导致荧光定位标记的颜色增多，相对而言变得复杂。免疫荧光技术主要是通过抗体与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。那么接下来，我们重点来介绍免疫荧光操作方法以及注意事项。操作步骤：1. 首先，在常温下将组织切片用免疫组化笔进行画圈，接着加入 0.1M PB 约 50 微升左右，进行每次 20 分钟的漂洗，漂洗
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