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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
32
- 英文名：
SABC Kit-POD(Mouse IgG)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100T-200T
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)价格
英文名称：SABC Kit-POD(Mouse IgG)
产品规格：100T-200T
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
保存条件-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2～8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片为例）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5～10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2～7.6）洗涤1～2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2～7.4）洗涤2～3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。
6．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlBio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液,20～37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlSABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20～37℃，30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色根据用量，用PBS（pH7.2～7.4）配制，按1mlPBS加入50μl20×DAB显色液A，加入50μl20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5～30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%TritonX-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项
如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01～0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2～7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)价格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
性成纤维细胞生长子(FGF2)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Rattus norvegicus (Rat)
质蛋白酶9(MMP9)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
表皮生长子(EGF)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
表皮生长子(EGF)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
人丝狀血球凝集素(FHA)ELISA试剂盒规格：96T/48T 特价促销
人松弛肽/松弛素(RLN)ELISA试剂盒 规格：96T/48T 特价促销
人性成纤维细胞生长子1(aFGF1)ELISA试剂盒规格：96T/48T 特价促销
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免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)价格LopinavirCDC123/C10orf7细胞分裂周期蛋白CDC123抗体ELISAKitforInterferonRegulatoryFactor5(IRF5)
CCDC16/zincfingerprotein830锌指蛋白830抗体ELISAKitforCytohesinInteractingProtein(CYTIP)
LoracarbefCDC20B细胞分裂周期蛋白20B抗体ELISAKitforB-CellLinkerProtein(BLNK)
LoracarbefL-Isomerccnb1ip1周期蛋白B1结合蛋白1抗体ELISAKitforB-LymphocyteChemoattractant1(BLC1)
CDC45L细胞分裂周期调控蛋白45抗体ELISAKitforGrowthRegulatedOncogeneBeta(GROb)
LoratadineCDCA2细胞分裂周期蛋白2抗体ELISAKitforGrowthRegulatedOncogeneGamma(GROg)
CEP152中心体蛋白152抗体ELISAKitforPhospholipaseCBeta3,PhosphoinositideSpecific(PLCb3)
CEP76中心体蛋白质76抗体ELISAKitforGlycophosphatidylinositol(GPI)
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)价格
英文名称：SABC Kit-POD(Mouse IgG)
产品规格：100T-200T
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。
保存条件-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2～8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片为例）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5～10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0）,电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2～7.6）洗涤1～2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2～7.4）洗涤2～3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。
6．根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlBio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠IgG工作液,20～37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μlSABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20～37℃，30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色根据用量，用PBS（pH7.2～7.4）配制，按1mlPBS加入50μl20×DAB显色液A，加入50μl20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5～30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%TritonX-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项
如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01～0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2～7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
免疫组化检测试剂盒(POD显色)(小鼠IgG)价格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
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质蛋白酶9(MMP9)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Mus musculus (Mouse)
表皮生长子(EGF)检测试剂盒(学发光免疫分析法) Homo sapiens (Human)
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一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
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文献和实验相关实验
2）将混合物覆盖在膜表面，1-2分钟，摇晃使均匀。 3）用保鲜膜把膜包起来，放入夹板中。 4）在暗室中将X光片，覆盖在膜的上面，夹好夹子，曝光1min。 5）显影、定影。 6）根据结果调整曝光时间和曝光区域，得到最佳结果。 注意：荧光在一段时间后会越来越弱。 2.DAB显色 DAB（3,3二氨基联苯胺）和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂，对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化染色应用特别理想。 对于AP标记的二抗我们选用BCIP
（1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗； （2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗 体孵育时间； （3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间； （4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现
5、切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长（大于 24 h）：原因上不清楚，但现象存在。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在 4ºC 冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。 6、一抗变质、质量差的多克隆抗体：注意抗体的有效期，过期的抗体要么不显色要么背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。
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