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27
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
10ml
待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称:抗荧光淬灭剂说明书
英文名称:
产品规格:10ml
发货周期:1~3天
产品保存4℃保存,一年有效。
产品说明
抗荧光衰减封片剂以高纯度甘油为基础,内含抗荧光淬灭剂,有强烈的抗荧光衰减作用,用于对荧光组织和细胞样品的封片。样品封片后4℃或-20℃避光保存2-3周,可最大限度延长荧光持续时间和维持荧光发光强度,同时封片剂中的其它成分有助于保持组织抗原抗体处于结合状态。本试剂操作简单,在封片时用枪滴一滴抗荧光淬灭封片液,盖上盖玻片即可。
产品应用
1.组织细胞免疫荧光组织化学染色样品封片。
2.染色体荧光观察封片。
3.核酸荧光原位杂交样品封片。
4.对所有光谱范围的荧光均有抗衰减作用,如FITC,Cy2,Cy3,Rhodamine,TexasRed,Cy5,Cy7,DAPI,AMCA,R6G,Hoechst33258。
使用方法
1.使用前请将封片剂平衡至室温。
2.吸去载玻片上的液体,稍微晾干残留液体。
3.取约20µl抗荧光淬灭封片液滴加在载玻片的样品处,也可取适量直接加到细胞培养孔内。封片剂有一定粘性,可剪掉移液器枪头少许,方便吸取。
4.盖上盖玻片,让切片接触封片液,尽量避免气泡。
5.随后直接进行荧光显微镜观察,玻片于4℃或-20℃避光保存2周,荧光无明显衰减。
注意事项
荧光物质均易发生淬灭,染色后的样品宜避光保存。在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光和尽早拍照。
【培养指南】
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类:
第一种:
是冻存产品,由液氮直接拿出,干冰运输给客户。一般不推荐这种,也较少使用这种方式,因为复苏手法对于细胞状态影响较大,一旦细胞状态不好,很难说是细胞自身不行,还是复苏没操作好;另外温度对细胞、基因功能状态影响很大,也不是细胞储存的zui好方式,快递时间也很难控制,多种因素影响产品的质量;干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种:
是我们复苏好细胞,QC通过后,T-25灌满培养基常温运输给客户,排除复苏造成影响,常温运输也对细胞影响也不大,只需加25元运费(顺丰)。
质量保证:我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,购买到货后,由我们实验室扩增、冻存,冻存的产品全部经过QC检测,100%进口来源,100%保证5代以内,活力>95%,无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作,不同的实验室采用的方法略有差异,但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
盐哆辛 含量: 规格:10mg/支
Pyridoxine, hydrochloride 含量: 规格:10mg/支
派洛宁B (焦宁B, 罗红) 含量: 规格:10mg/支
Pyronin B 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
焦宁 Y (派洛宁 Y, 罗红G) 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
Pyronin Y 含量: 规格:20mg/支
含量: 规格:10mg/支
Pyruvic Acid, Sodium Salt 含量: 规格:5mg/支
辣根过物酶标记链霉亲和素 含量:≥98% 规格:20mg/支
Streptavidin/HRP 含量:HPLC≥97% 规格:20mg/支
链 含量:HPLC≥97% 规格:10mg/支
Streptomycin Sulfate 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
链脲佐 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
Streptozotocin 含量:≥ 98% 规格:20 mg/支
琥珀 (二) 含量:≥ 98% 规格:10mg/支
Succinic Acid 含量:≥98% 规格:10mg/支
抗荧光淬灭剂说明书48T/96T进口、国产1620CetylAlcohol鉴别
ChloroquinePhosphate48T/96T进口、国产1620CetylPalmitate检查
48T/96T进口、国产1620CetylpyridiniumChloride含量测定
48T/96T进口、国产1620PowderedChasteTreeExtractHPLC法含量测定
Chlorothiazide48T/96T进口、国产1620Chloramphenicol含量测定
Chloroxylenol48T/96T进口、国产1620ChloramphenicolPalmitate含量测定
48T/96T进口、国产1620检查
操作步骤(仅供参考):
1、抗荧光淬灭剂说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000~2000g 离心 1min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验immyself 有那种干了之后会把盖玻片牢牢粘著的吗? 现在用的封片剂是液态的,老是滑来滑去 谢谢! hongfunv1984 我最近也在做细胞免疫荧光,也是发现这个问题。后来发现是防淬灭剂加的太多了,现在在做实验室就没有这种情况了。。你可以稍加一点就行了。用10*10的盖玻片封片。 photomedicine 是的,防淬灭剂不能加太多,否则会滑来滑去,加1-2滴其实就够
人抗神经节苷脂抗体(GM1 IgG)ELISA试剂盒 说明书
上海西唐生物科技有限公司 021-55229872, 65333639 www.westang.com 人抗神经节苷脂抗体 (GM1 IgG)ELISA 试剂盒 ( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和生物体液内 ) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 GM1 IgG单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 GM1 IgG与单抗结合,加入生物素化的抗人
剂。如卤素离子、重金属离子、具有氧化性的有机化合物(硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物和羟基化合物)及氧分子等。 2)荧光的抗淬灭:标记样品的荧光淬灭是在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察时遇到的主要问题。由于激光扫描共聚焦显微镜具有更强的功率和聚焦更准确的光束,与普通荧光显微镜相比,标本的光漂白作用更为明显,荧光素的荧光可在连续观察过程中逐渐减弱或消失。因此,应考虑使用抗荧光淬灭剂(抗荧光衰减剂)。常用抗荧光淬灭剂有P-苯二胺(Para-phenylene diamine,PPD)、n-丙基
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