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- 2025年07月14日
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- 详细信息
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- 技术资料
- 库存：
41
- 英文名：
0.4% Typan Blue Solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20ml
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：台盼蓝染色液(0.4%)规格
英文名称：0.4% Typan Blue Solution
产品规格：20ml
发货周期：1～3天
台盼蓝（TrypanBlue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。
本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。
使用方法
1）对于悬浮细胞，离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS，HBSS重悬制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。
2）取0.5ml单细胞悬液，按照11比例与0.5ml0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~10min。
【注1】因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。
【注2】若细胞密度比较高，可取0.2ml单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5ml，之后再用0.5ml0.4%台盼蓝染色液染色。
3）取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。
【注1】用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。
【注2】1mm2方格内细胞数通常控制在20-50cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。
4）按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，
a，计算每ml细胞数目Cells/ml=1mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×104；【注】此时的稀释倍数为步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数
b，总细胞数目Totalcells=（Cells/ml）×最初制备单细胞悬液的总体积
c，细胞活力值Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数×100
【注】通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。
储存条件室温，有效期2年
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
台盼蓝染色液(0.4%)规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
噻啶邻氧酰/2-氧酰/2-Ethoxybenzoyl chloride
异酸酯对/4-/对/对/对克勒梭尔/4-/P-/p-Cresol
1H-吲唑-5-醇间/间/间蒸木油酸/3-/3-/间/间克勒梭尔/间羟基/m-Cresol
异酸肉桂酯Iodoacetyl LC Biotin
基二酸二酯酸/酸/代酸盐/化酸/Sodium iodoacetate
1,1-环基二羧酸二酯组织切片挂载介质/组织切片安装介质/HistoChoice® mounting media
R)-(+)-9-(2-羟基)腺嘌呤组织切片清除剂/HistoChoice® clearing agent
4-羟基-3-啶组织切片固定剂/HistoChoice® MB tissue Fixative
3,5-二酰皮肤组织切片固定剂/HistoChoice® Dermatology Fixative
2-[(2-己基)氧]-醇六和化钴/六基化钴；化钴六络合物；化六合钴；六基化钴(III)；三六络钴/Hexaamminecobalt(III) chloride
台盼蓝染色液(0.4%)规格小RNA克隆试剂盒 规格HPLC≥98%;10mgConiferin
一站式TA克隆试剂盒（A） 规格HPLC≥98%;20mgEchinacoside
一站式TA克隆试剂盒（B） 规格HPLC≥98%;20mgUsnic acid
一站式平末端克隆试剂盒 规格HPLC≥98%;10mgPinoresinol diglucoside
抗菌素 规格HPLC≥98%;20mgPhysalin L
苄青霉素干 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside A
苄青霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside B
博莱霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside D
潮霉素B 规格HPLC≥98%;20mgJervine
地塞米松 规格HPLC≥98%;20mgAmentoflavone
多粘菌素B盐 规格HPLC≥98%;20mgtalatisamine
放素D 规格HPLC≥98%;10mgOrcinol glucosid
规格HPLC≥98%;20mgHeterophyllin B
杆菌肽溶 规格HPLC≥98%;20mgSantalol
红霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgAucubin
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：台盼蓝染色液(0.4%)规格
英文名称：0.4% Typan Blue Solution
产品规格：20ml
发货周期：1～3天
台盼蓝（TrypanBlue），一种偶氮、亲水性酸性蓝色染料，可透过死亡细胞和垂死细胞的细胞膜，将其染成蓝色，而活细胞由于其细胞膜的完整性，可将台盼蓝排斥在外，因此，通过颜色的变化即可将活细胞（活细胞呈透明无色）和死细胞鉴别开来，基于此原理，本品广泛用于细胞活性水平的常规评估。台盼蓝还可染色胶原和淀粉样蛋白。台盼蓝与蛋白结合形成的复合物可发出红色荧光。另外，台盼蓝（合适浓度）还常用来淬灭细胞表面的自荧光或者其他荧光信号。
本品为溶于生理盐溶液的0.4%（w/v）台盼蓝染色液，以无菌形式提供，细胞培养级别。
使用方法
1）对于悬浮细胞，离心收集细胞，充分清洗后，用适当缓冲液如PBS，HBSS重悬制成单细胞悬液；对于贴壁细胞，先用胰酶消化细胞，再按照悬浮细胞的方法制备单细胞悬液。
2）取0.5ml单细胞悬液，按照11比例与0.5ml0.4%台盼蓝染色液充分混匀，室温染色3~10min。
【注1】因台盼蓝具有细胞毒性，染色时间过久会导致部分死细胞染色，干扰计数。
【注2】若细胞密度比较高，可取0.2ml单细胞悬液，经适当缓冲液稀释到0.5ml，之后再用0.5ml0.4%台盼蓝染色液染色。
3）取少量上述染色细胞加入血细胞计数板，于显微镜低倍镜下计数，分别计算着色细胞（即损伤细胞和死细胞）和总细胞。
【注1】用移液枪加染色细胞时，沿着盖玻片的边缘轻轻加液使其完全覆盖住整个小室。不可过量加液或者不足量。
【注2】1mm2方格内细胞数通常控制在20-50cells，当细胞数超过200个，需重新调整稀释倍数。
4）按照以下公式来计算细胞数目和活细胞百分比，
a，计算每ml细胞数目Cells/ml=1mm2大方格内的平均细胞数×稀释倍数×104；【注】此时的稀释倍数为步骤2所取的单细胞悬液与台盼蓝染色液混合后的稀释倍数
b，总细胞数目Totalcells=（Cells/ml）×最初制备单细胞悬液的总体积
c，细胞活力值Viability（%）=（总细胞数-总着色细胞数）/总细胞数×100
【注】通常情况，健康的对数期培养细胞，活细胞至少占到95%。
储存条件室温，有效期2年
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
台盼蓝染色液(0.4%)规格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
噻啶邻氧酰/2-氧酰/2-Ethoxybenzoyl chloride
异酸酯对/4-/对/对/对克勒梭尔/4-/P-/p-Cresol
1H-吲唑-5-醇间/间/间蒸木油酸/3-/3-/间/间克勒梭尔/间羟基/m-Cresol
异酸肉桂酯Iodoacetyl LC Biotin
基二酸二酯酸/酸/代酸盐/化酸/Sodium iodoacetate
1,1-环基二羧酸二酯组织切片挂载介质/组织切片安装介质/HistoChoice® mounting media
R)-(+)-9-(2-羟基)腺嘌呤组织切片清除剂/HistoChoice® clearing agent
4-羟基-3-啶组织切片固定剂/HistoChoice® MB tissue Fixative
3,5-二酰皮肤组织切片固定剂/HistoChoice® Dermatology Fixative
2-[(2-己基)氧]-醇六和化钴/六基化钴；化钴六络合物；化六合钴；六基化钴(III)；三六络钴/Hexaamminecobalt(III) chloride
台盼蓝染色液(0.4%)规格小RNA克隆试剂盒 规格HPLC≥98%;10mgConiferin
一站式TA克隆试剂盒（A） 规格HPLC≥98%;20mgEchinacoside
一站式TA克隆试剂盒（B） 规格HPLC≥98%;20mgUsnic acid
一站式平末端克隆试剂盒 规格HPLC≥98%;10mgPinoresinol diglucoside
抗菌素 规格HPLC≥98%;20mgPhysalin L
苄青霉素干 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside A
苄青霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside B
博莱霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgJujuboside D
潮霉素B 规格HPLC≥98%;20mgJervine
地塞米松 规格HPLC≥98%;20mgAmentoflavone
多粘菌素B盐 规格HPLC≥98%;20mgtalatisamine
放素D 规格HPLC≥98%;10mgOrcinol glucosid
规格HPLC≥98%;20mgHeterophyllin B
杆菌肽溶 规格HPLC≥98%;20mgSantalol
红霉素溶 规格HPLC≥98%;20mgAucubin
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验相关实验
变化。此外配制hanks液所用的试剂必须达到一级GR或者二级AR规格。
扩增曲线的分析攻略。 1、确认软件设置是否正确 对照试剂盒说明书，检查时间、温度、循环数、荧光采集等是否设置正确。有一个比较容易忽略的设置问题是，需要看下所选用的试剂中是否含有 ROX 来作为参比荧光染料。Applied Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪器可以用 ROX 来作为参比荧光染料，用以校正仪器系统以外的物理误差，比如均一化校正由于移液误差或者蒸发导致的批内体积误差等。目前市面上有的的荧光定量 PCR 预混液是不含有 ROX 的，当用此类试剂的时候，应该将 ROX 参比
1、电导电极规格常数和电导池常数：常用电导电极规格常数（J0）有四种：0.01、0.1、1和10。其实际电导池常数（J实）允差为≤±20％。即同一规格常数的电导电极，其实际电导池常数的存在范围为J实=（0.8～1.2）J0。测量液体介质，选用何种规格的电导电极，应根据被测液介质电导率范围而定。一般地，四种规格电导电极，适用电导率测量范围参照表1。表1选用电极规格常数对应被测液介质电导率量程电极规格常数0.010.11（光亮）1（铂黑）10适用测量范围μS/cm0～30.1～301～100100
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