EDTA脱钙液规格

【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：EDTA脱钙液规格
英文名称：
产品规格：500ml
发货周期：1～3天
保存条件4℃保存,一年有效，避免阳光直射。
产品简介
在病理实验制作切片时，我们会经常碰到一些含钙组织，而且钙十分坚硬。由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同，含钙的组织一般不能直接制作切片。骨组织含钙量最多。除了骨组织之外其它组织也可发生钙化，在组织中形成钙化区，所以需要经过脱钙过程。脱钙是制作骨组织切片的重要环节，尤其是要进行免疫组织化学染色的骨组织。
乙二四乙酸(EDTA)与羟基磷灰石结晶的外层钙结合，形成可溶性的非离子化合物，同时又促进晶体内层的结合钙向外转移。借助这种连续性的作用使羟基磷灰石晶体逐渐融解，pH中性时可起螯合作用。其特点是脱钙时间长，对骨组织的损伤少，酶活性(碱性磷酸酶)和细胞抗原性保存较好，制作的切片可用于组织化学和免疫组化分析。
主要用途
用于骨组织、牙齿等脱钙。
使用说明
1．将骨组织截成0.5cm×0.3cm×0.2cm大小骨片，生理盐水清洗后立即投入冷冻的固定液中，4℃固定12h~24h；固定结束后骨片在0.2mol磷酸缓冲液中充分漂洗。
2．漂洗后投入脱钙液中，室温下脱钙，每日检查脱钙情况，直至骨片脱钙完全为止。脱钙结束后，骨片用蒸馏水冲洗20min，脱钙液每隔4-5天更换一次新液，经过3次更换新液后，此后每天更换新液，但请根据具体实验具体分析。以大头针能刺进骨密质为完成脱钙标准。
3．然后进入常规脱水处理程序并包埋、切片。
注意事项
1.为使脱钙更为充分，每次最好更换新液，这既弃去了脱掉的钙盐，增加脱钙强度，又起到降低脱钙温度的作用。
2.脱钙时间以脱钙完成为标准以大头针能轻易刺进骨密质为准。
3.脱钙温度不要太高，一般以室温(25℃)为宜，高温可加快脱钙速度，但可破坏组织中的核酸而影响染色效果。低温(4℃)则会减慢脱钙速度，使组织在脱钙液中浸泡过久而引起损伤。
4.为了提高EDTA的脱钙速度，骨组织取材尽量取薄。
5.为了提高EDTA的脱钙速度，也可以采用微波脱钙。用微波炉辅助脱钙可以大大缩短脱钙时间，以微波间歇脱钙，每次辐射1分钟，每次辐射之间都将烧杯移至室温，冷却5分钟，以保证每次的微波辐射脱钙液的温度不至于太高(70℃)。脱钙时脱钙液温度过高，易导致假阴性，背景色深等缺点。因此，在时间要求不紧迫的前提下，该方法也不应是。
6.为达到骨组织既充分脱钙，又保护骨组织的抗原不受破坏，需要对含钙的组织充分固定之后再进行脱钙。然后再行常规制片。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
4Nitrophenyl isocyanate异对100287
Vinyltrimethoxysilane三硅317069
NA(R)2四
FRAXINELLONE梣28808620
MONALIDE庚酰草7287367
Tellurium tetrachloride四碲10026070
FMOCCYS(ACM)WANG RESINFMOCCYS(ACM)WANG RESIN
3Methylphenethyl alcohol31875894
Harpagoside哈巴俄苷19210129
Ethyl (trimethylsilyl)acetate三硅4071889
3,4',5TRIMETHOXYTRANSSTILBENE白藜芦三22255227
Dibenzothiophene二并132650
4Fluorophenethyl alcohol对7589277
Aloeemodin芦荟大黄素481721
1METHYL3PROPYLIMIDAZOLIUM IODIDE13咪唑嗡119171185
TEMED　含量：≥ 98%　规格：5mg/支
TMB显色试剂盒(组或膜HRP显色用)　含量：≥97%　规格：5mg/支
TMB Substrate For Blotting　含量：≥98%　规格：10mg/支
TMB显色试剂盒（ELISA HRP显色用）　含量：≥98%　规格：10mg/支
TMB Substrate For Elisa　含量：≥98%　规格：20mg/支
Western半干法转膜　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Transfer Buffer　含量：≥98%　规格：20mg/支
瑞吉染色剂　含量：≥ 98%　规格：10mg/支, 5mg/支
EDTA脱钙液规格48T/96T进口、国产1620Azo-aminoglutethimideHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620AztreonamHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620AztreonamE-IsomerHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620OpenRingAztreonamHPLC≥98%
Bendroflumethiazide48T/96T进口、国产1620BacampicillinHydrochlorideHPLC≥98%
BenoxinateHydrochloride48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
Benzaldehyde(ListChemical)48T/96T进口、国产1620BacitracinZincHPLC≥98%
操作步骤(仅供参考)：
1、EDTA脱钙液规格贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。