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- 文献和实验
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33
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详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1盒
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
产品规格
Bradford染色液100ml
BSA标准品20ml(2mg/ml)
产品描述应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔
产品保存4℃保存，一年有效。
产品说明Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液(考马斯亮蓝G-250染料)与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项
1．各取样操作应准确无误。
2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。
3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4．Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。
5．Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，TritonX-100低于0.05%，Tween20/60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明
一、配制BSA标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
二、检测方法
A．试管法检测(线性范围100-1500μg/ml)
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Methyl ptoluenesulfonate对80488
Sodium 2sulfoethyl methacrylate21804871
2Hydroxyethyl methacrylate羟868779
3,3,4,4Tetrachlorotetrahydrothiophene 1,1dioxide3,3,4,4四环砜3737415
LIGNOCERIC ACID木蜡557595
1NBoc3Azetidinecarboxylic acid1BOC环3羧142253552
Ethyltriphenylphosphonium bromide三溴1530321
transZeatin玉米素1637394
3CHLORO2HYDROXYPROPANESULFONIC ACID SODIUM SALT32羟126830
Peri acid周位82757
REVERSE TRANSCRIPTASE, MMLV, RNASEH+MMLV反转录酶9068386
2,6Diethylaniline2,6二579668
Sibutramine hydrochloride84485007
1METHYL2INDOLINONENN啉61701
1(3Chloropropoxy)4fluorobenzene1(3)41716423
Silwet L77 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Silwet L77 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
脱脂奶 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Skim milk 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
超物歧酶 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
SOD 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
无水 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Sodium Acetate, Anhydrous 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格BacitracinZinc48T/96T进口、国产1620AurothioglucoseHPLC≥99%
Baclofen48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
BaclofenRelatedCompoundA48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
BalsalazideDisodium48T/96T进口、国产1620AzaperoneHPLC≥98%
BalsalazideRelatedCompoundA48T/96T进口、国产1620AzatadineMaleateHPLC≥98%
BalsalazideRelatedCompoundB48T/96T进口、国产1620AzathioprineHPLC≥98%
BeclomethasoneDipropionate48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格
英文名称：
产品规格：1盒
发货周期：1～3天
产品规格
Bradford染色液100ml
BSA标准品20ml(2mg/ml)
产品描述应用试管法可以测量100管，微孔板法可以测量400孔
产品保存4℃保存，一年有效。
产品说明Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液(考马斯亮蓝G-250染料)与蛋白结合，使染料的最大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，最低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项
1．各取样操作应准确无误。
2．在100～1500μg/ml的浓度范围线性最佳。
3．加入样品后的试剂，混合均匀后，静置反应，测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4．Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。
5．Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。
6．每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7．Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，TritonX-100低于0.05%，Tween20/60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品，建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明
一、配制BSA标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。
二、检测方法
A．试管法检测(线性范围100-1500μg/ml)
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
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质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
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Sodium 2sulfoethyl methacrylate21804871
2Hydroxyethyl methacrylate羟868779
3,3,4,4Tetrachlorotetrahydrothiophene 1,1dioxide3,3,4,4四环砜3737415
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1NBoc3Azetidinecarboxylic acid1BOC环3羧142253552
Ethyltriphenylphosphonium bromide三溴1530321
transZeatin玉米素1637394
3CHLORO2HYDROXYPROPANESULFONIC ACID SODIUM SALT32羟126830
Peri acid周位82757
REVERSE TRANSCRIPTASE, MMLV, RNASEH+MMLV反转录酶9068386
2,6Diethylaniline2,6二579668
Sibutramine hydrochloride84485007
1METHYL2INDOLINONENN啉61701
1(3Chloropropoxy)4fluorobenzene1(3)41716423
Silwet L77 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Silwet L77 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
脱脂奶 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Skim milk 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
超物歧酶 含量：≥ 98% 规格：5 mg/支
SOD 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
无水 含量：≥ 98% 规格：20 mg/支
Sodium Acetate, Anhydrous 含量：暂不提供 规格：1ml，3ml
Bradford蛋白浓度测定试剂盒价格BacitracinZinc48T/96T进口、国产1620AurothioglucoseHPLC≥99%
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BeclomethasoneDipropionate48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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文献和实验相关实验
原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465－595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液： ①Bradford储存液 100ml95％乙醇 200ml88％磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理双缩脲法(Biuret法)和Folin�酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法)，是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置(lmax)，由465nm变为595nm，溶液的颜色
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技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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