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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
42
- 英文名：
One-Tube TMB Solution
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100mL
【细胞冻存】
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：一管式TMB显色液(沉淀型)说明书
英文名称：One-Tube TMB Solution
产品规格：100mL
发货周期：1～3天
TMB(四甲基联)是辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase、HRP）的显色底物，在辣根过氧化物酶和H2O2存在时，TMB会产生可溶性蓝色产物（光吸收在370nm），加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS和OPD）相比，TMB不但灵敏，而且无毒，所以在ELISA中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两个组份组成（另一个是H2O2），必须在使用前新鲜配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点，本公司开发了只有一个溶液的一管式TMB显色液
产品特点
1.即开即用，操作简单，用户不需要配制任何溶液。
2.显色液只是单一溶液，简化了操作步骤，降低了操作误差，结果更加稳定。
3.既可用于ELISA等的显色液，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4.该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂，可以在4℃长期放置。
5.分沉淀可溶型（BTN91101A型，适用于ELISA）和沉淀不可溶型（BTN91101B型，适用于Western印迹膜免疫检测）两种。
保存条件2-8℃避光保存，有效期一年。
使用方法
1.将已经用封堵液、一抗和二抗处理的Western膜用自备的PBS缓冲液洗涤一次。封堵液、一抗和二抗的处理同常规方法。
2.将膜浸入本产品（B型）中，室温摇晃5-30分钟，并在颜色达到所需深度时候将Western膜取出以终止反应。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Cupric oxide铜250克AR，99%
Cupric oxide二铜500克AR，99%
Cupric hydroxide可杀得101100克FCC, Kosher，
Cupric citrate枸橼铜250克CP，95%
Cupric bromide二溴化铜500克AR，99%
Cupric acetate monohydrate一水铜50克CP
CupferronN-亚羟铵盐25克CP
CTX头孢1克BR，17Tabor u/mg
CTC金盐盐5克层析，150u/mg
CTAC鲸蜡三化铵25克BS
CTAB鲸蜡三溴化铵5克AR
Crystal violet龙胆紫100ul/支BR，羧化度≥60%
Crotaline单响尾蛇毒蛋白100毫克BR，
CRH肌酶/肌酶25毫克精制级，20u/ul
Cresyl Violet acetate紫50毫升高
一管式TMB显色液(沉淀型)说明书DL-酯盐盐Ginsenoside Rg3Ractopamine /PAYLEAN (1B12) 小鼠抗莱克多巴单克隆抗体sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 可溶性CD38犬白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产D-甘酯盐盐Ginsenoside Rh1特价供应Cellulase 纤维酶CR2/sCD21(Human Soluble Cluster of differentiation 21) ELISA Kit 可溶性CD21鸡白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-酯Ginsenoside Rh2现货促销Pectinesterase 胶酶抗体PACAP ELISA Kit 小鼠垂体苷环化酶激活肽白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-酪叔酯Ginsenoside Rh3特价促销DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗体（C端）human CHOP ELISA Kit 内质网应激相关蛋白CHOP小鼠白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
操作步骤(仅供参考)：
1、一管式TMB显色液(沉淀型)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：一管式TMB显色液(沉淀型)说明书
英文名称：One-Tube TMB Solution
产品规格：100mL
发货周期：1～3天
TMB(四甲基联)是辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase、HRP）的显色底物，在辣根过氧化物酶和H2O2存在时，TMB会产生可溶性蓝色产物（光吸收在370nm），加入硫酸后，溶液呈黄色，此时可以在450nm测定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS和OPD）相比，TMB不但灵敏，而且无毒，所以在ELISA中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两个组份组成（另一个是H2O2），必须在使用前新鲜配制，并且容易产生沉淀，使用相对不太方便，并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点，本公司开发了只有一个溶液的一管式TMB显色液
产品特点
1.即开即用，操作简单，用户不需要配制任何溶液。
2.显色液只是单一溶液，简化了操作步骤，降低了操作误差，结果更加稳定。
3.既可用于ELISA等的显色液，也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。
4.该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂，可以在4℃长期放置。
5.分沉淀可溶型（BTN91101A型，适用于ELISA）和沉淀不可溶型（BTN91101B型，适用于Western印迹膜免疫检测）两种。
保存条件2-8℃避光保存，有效期一年。
使用方法
1.将已经用封堵液、一抗和二抗处理的Western膜用自备的PBS缓冲液洗涤一次。封堵液、一抗和二抗的处理同常规方法。
2.将膜浸入本产品（B型）中，室温摇晃5-30分钟，并在颜色达到所需深度时候将Western膜取出以终止反应。
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
Cupric oxide铜250克AR，99%
Cupric oxide二铜500克AR，99%
Cupric hydroxide可杀得101100克FCC, Kosher，
Cupric citrate枸橼铜250克CP，95%
Cupric bromide二溴化铜500克AR，99%
Cupric acetate monohydrate一水铜50克CP
CupferronN-亚羟铵盐25克CP
CTX头孢1克BR，17Tabor u/mg
CTC金盐盐5克层析，150u/mg
CTAC鲸蜡三化铵25克BS
CTAB鲸蜡三溴化铵5克AR
Crystal violet龙胆紫100ul/支BR，羧化度≥60%
Crotaline单响尾蛇毒蛋白100毫克BR，
CRH肌酶/肌酶25毫克精制级，20u/ul
Cresyl Violet acetate紫50毫升高
一管式TMB显色液(沉淀型)说明书DL-酯盐盐Ginsenoside Rg3Ractopamine /PAYLEAN (1B12) 小鼠抗莱克多巴单克隆抗体sCD38(Human Soluble Cluster of differentiation 38) ELISA Kit 可溶性CD38犬白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产D-甘酯盐盐Ginsenoside Rh1特价供应Cellulase 纤维酶CR2/sCD21(Human Soluble Cluster of differentiation 21) ELISA Kit 可溶性CD21鸡白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-酯Ginsenoside Rh2现货促销Pectinesterase 胶酶抗体PACAP ELISA Kit 小鼠垂体苷环化酶激活肽白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-酪叔酯Ginsenoside Rh3特价促销DLK1/Delta/DLL1 (C-terminus) 穿膜蛋白DLK1抗体（C端）human CHOP ELISA Kit 内质网应激相关蛋白CHOP小鼠白介18(IL-18)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
操作步骤(仅供参考)：
1、一管式TMB显色液(沉淀型)说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验相关实验
最近 WB 的结果趋势不是很理想，因为给了蛋白 B 的抑制剂蛋白 B 却没有明显变化。于是大伙儿一合计，可能需要再看看蛋白质之间的相互作用，会不会是抑制剂影响了蛋白 B 和蛋白 C 之间的结合，而不是直接导致蛋白 B 的降解。 大家都知道研究蛋白质相互作用的三大经典方法是：酵母双杂交（Y2 H），免疫共沉淀（CoIP）和 GST pulldown。结合我们课题组的这个实验，因为只需看看蛋白 B 和 C 之间的结合，而且已知蛋白 B 和 C 是会结合的，所以可能用 CoIP 最简便
一、原理：本仪器为卡尔-费休（Kart Fischer）容量滴定法测定水份含量的仪器，采用“永停法”来确定终点。根据半电池反应：I2＋2e2Iˉ，溶液中同时存在I2及Iˉ时上述反应分别在两个电极上进行，即在一个电极上I2被还原，而再另一个电极上Iˉ被氧化，因此在两个电极之间有电流通过。如果溶液中只有Iˉ而无I2则电极间无电流通过。当滴定终点时溶液中有微量卡尔-费休试剂存在，即有Iˉ及I2同时存在，这时溶液导电，仪器显示滴定到达终点。反应式：I2+SO2+3C5H5N+CH3OH+H2O→2C
最近 WB 的结果趋势不是很理想，因为给了蛋白 B 的抑制剂蛋白 B 却没有明显变化。于是大伙儿一合计，可能需要再看看蛋白质之间的相互作用，会不会是抑制剂影响了蛋白 B 和蛋白 C 之间的结合，而不是直接导致蛋白 B 的降解。大家都知道研究蛋白质相互作用的三大经典方法是：酵母双杂交（Y2 H），免疫共沉淀（CoIP）和 GST pulldown。结合我们课题组的这个实验，因为只需看看蛋白 B 和 C 之间的结合，而且已知蛋白 B 和 C 是会结合的，所以可能用 CoIP 最简便。那么问题
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