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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
29
- 英文名：
Blocking Buffer For Western Blot
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
一、Western封闭液(WB封闭液)说明书分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Western封闭液(WB封闭液)说明书英文名称：Blocking Buffer For Western Blot
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
本品可以用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜的封闭。封闭后，可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合，降低背景，增强信噪比。按照每张膜封闭需要5-10毫升封闭液计算，一个包装的Western封闭液可以封闭10-20张膜。
注意事项通常在室温封闭60分钟即可。如果对于一些背景非常高的抗体，可以4℃封闭过夜。
储存条件4℃，有效期一年。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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(S)()4Bromoalphaphenylethylamine(S)()1(4溴)27298971
EDTA, Disodium Salt, Dihydrate 含量：暂不提供 规格：250U，500U
二四 含量：暂不提供 规格：250U，500U
EDTA, Free Acid 含量：暂不提供 规格：250U，500U
二四四 含量：暂不提供 规格：250U， 500U
EDTA, Tetrasodium Salt, Anhydrate 含量：暂不提供 规格：250U，500U
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Western封闭液(WB封闭液)说明书DHRS13短链脱还原酶13抗体大鼠转化生长子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒1026353207
DHRS7视网膜短链脱酶/还原酶家族7抗体大鼠细胞色素P4502E1(CYP2E1)ELISA试剂盒70024407
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DHRS4L2短链脱酶/还原酶家族4样2蛋白抗体大鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒78628805
GIMAP1GTP酶IMAP家族成员1抗体大鼠载脂蛋白E(ApoE)ELISA试剂盒
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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文献和实验做了很久的 WB（western blot），走了很多弯路，其实发现 WB 想要做好并不难，总结了 WB 实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题 1：转膜不充分 (1) 膜没有完全均匀湿透 使用 100% methanol 浸透膜。 (2) 靶蛋白分子量小于 10 000 选择小孔径的膜，缩短转移
① 膜封闭时间不够，室温下通常摇床孵育膜 1h，出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间； ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高，可以多设置几组一抗浓度，摸索最适宜的抗体稀释度； ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况，因此实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜。 3、WB 结果中有杂带干扰 ① 抗体纯度不高会产生非特异性条带影响结果，高纯度抗体条带特异性更好，建议更换抗体； ② 一抗浓度过高，降低一抗稀释比，目的条带和杂带可能会减弱
四个多肽，我想问下我用什么做封闭液才行呢? Q1、BSA或是酪蛋白的封闭液都行，封闭是为了封闭抗原没有占据的空白点，跟你的多肽用何种蛋白偶联没有任何关系! H、小弟课题牵涉到ELISA检测血清中抗原，在网上看到封闭液的配方又很多种，由于经费有限，小弟想是否也可以效仿western blot 使用脱脂奶粉作配封闭液，不知各位有没有这方面的经验，或者能介绍一下又有效又实惠的配方 Q1、脱脂奶粉做封闭液是相当得可以，另外廉价的封闭液有BSA，酪蛋白等。都可以用来做封闭液
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