总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽测定试剂盒(微板法)说明书

实验报告：
一、总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽测定试剂盒(微板法)说明书分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：总谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽测定试剂盒(微板法)说明书
英文名称：Toal glutathione / Oxidized glutathione assay kit
产品规格：96T|48T
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
检测指标：总谷胱甘肽;氧化型谷胱甘肽
本试剂盒可测各种动物血清（浆）、组织、全血、红细胞等样本。谷胱甘肽在机体内的广泛分布和多功能性愈来愈引起科研工作者的注意。它在许多重要的生物体现象中起着直接或间接的作用，因而涉及到许多不同的研究课 题，如酶反应机理，蛋白质和DNA等大分子的生物合成、中间代谢、辐射、肿瘤、免疫、环境毒素和老化等。特别是近年来许多研究课题都涉及到细胞对活性氧和 自由基的防御作用。其中测定生物样品中，特别是血清（浆）中还原型和氧化型谷胱甘肽（GSH和GSSG）含量变化，是机体氧化物牵累的重要指标。
优点如下：
1、快速简便：全程约40分钟，可测80例左右样本；
2、取样量微：仅需110ul即可测样本中的T-GSH 、GSSG的含量；
6、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强；
3、稳定性好：试剂盒2～8℃存放3个月有效；
4、再现性好：变异系数CV=1.2%；
5、回收试验： X =96%；
6、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强；
7、测试面广：可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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Glyceric acid phosphate dehydrogenase松萝酸
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培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。