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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
详见说明书
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
100ml
待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
中文名称：Western封闭液说明书
英文名称：
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
用途
用于Western时转移了蛋白样品的PVDF膜或NC膜(硝酸纤维素)的封闭
注意事项
主要由TBS、封闭剂、防腐剂、antifoamA等组成，一般每张膜封闭需要5-10ml。
储存条件4℃，6个月
【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
1-Hexadecanol1-十六100克AR，99%
1-Heptanol葡萄花25克CP，99%
1-Dodecanethiol正十二100克AR，99%
1-Chlorohexadecane1-十六25克AR，99%
1-Chlorodecane1-25克AR，
1-Bromooctane1-溴代正辛100克AR，47.8%
1-Bromonaphthaleneα-溴代25克AR，95%
1-Bromohexadecane十六溴500克AR，47.8%
1-Bromoheptane1-溴庚25克超，99.995%
1-Bromodecane溴1克BR
1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic acid4--3-羟-1-5克2.5N，0.15mm×100mm
18-Crown-61,4,7,10,13,16-六环十八5克CP，
14.4-116kDa Protein Molecular weight Mark14.4-116kDa分子量MARK100克生物技术级,150u/mg
12-Aminolauric acid12-十二25克AR，99%
11-Aminoundecanoic acidω-十一50毫克AR，99%
Western封闭液说明书ModafinilRelatedCompoundDCCDC7卷曲螺旋结构域蛋白7抗体ELISAKitforTATABindingProtein(TBP)
ModafinilRelatedCompoundECCDC80卷曲螺旋结构域蛋白80抗体ELISAKitforTumorNecrosisFactorAlpha(TNFa)
ModafinilCIVCD163L1CD163蛋白样1抗体ELISAKitforColonyStimulatingFactor2,GranulocyteMacrophage(GMCSF)
MolindoneHydrochlorideCDAN1先天性红细胞生成异常性贫血蛋白1抗体ELISAKitforMyeloidDifferentiationFactor88(MyD88)
MometasoneFuroateCDK2AP2细胞周期素依赖激酶2相关蛋白2抗体ELISAKitforFarnesylDiphosphateFarnesyltransferase1(FDFT1)
MonensinSodiumCEACAM21癌胚抗原相关细胞粘附分子21抗体ELISAKitforT-CellLeukemia/LymphomaProtein1A(TCL1A)
MonobenzoneCDKAL1周期素依赖性激酶5调节蛋白1样蛋白1抗体ELISAKitforGlycocalicin(GC)
MonoethanolamineCEACAM16/CEAL2癌胚抗原相关细胞粘附分子16抗体ELISAKitforKruppelLikeFactor5,Intestinal(KLF5)
操作步骤(仅供参考)：
1、Western封闭液说明书贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
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文献和实验孵育(Primary antibody incubation)： 参考一抗的说明书，按照适当比例用稀释一抗。 吸尽封闭液，立即加入稀释好的一抗，室温或4℃在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时。如果一抗孵育一小时效果不佳，可以4℃缓慢摇动孵育过夜。或更据抗体的说明选择适当的孵育温度和时间。 回收一抗。加入Western洗涤液，在侧摆摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。 注
是不是做 Western 的时候，会遇到这样的情况呢？没错，就是背景很脏。造成背景脏的原因有很多，比如一抗没洗干净，或者二抗没洗干净，还有就是封闭的时候不完全。但其实，封闭液也是你们很容易忽略的一个环境哈。封闭液有几种？除了脱脂奶粉和 BSA 还有啥你们能想到的？第一种封闭液就是脱脂奶粉，这是异常便宜的封闭液品种，当然也应该是你们最常用的封闭液配方了。（甚至我们用过特仑苏）但是，你们应该注意到的是，脱脂奶粉中有大量的生物素，也就是说你做的蛋白要是用生物素标记的，一抗也是抗生物素的。那用脱脂
zhangyuxianggx 各位western达人，本人在western操作中屡次失败，现有几个问题跟达人们请教一下： 1、我的蛋白是96kDa,选择8%的分离胶有没有问题？ 2、配制浓缩胶我用的是0.5M Tris-HCL(PH=6.8)，但是看到好多配方用的都是1.0MTris-HCL(PH=6.8)，这个有没有什么影响？ 3、转膜是用的300mA,40min，看着转膜后胶很干净，就一直用的这个电流和时间。但是最后膜上总是很乱，背景
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