普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,核固红法)说明书

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,核固红法)说明书
英文名称：
产品规格：100ml
发货周期：1～3天
含铁血黄素(hemosiderin)是一种血红蛋白源性色素，为金黄色或棕黄色颗粒，因其含铁、金黄色，故称为含铁血黄素。当红细胞被巨噬细胞吞噬后，在溶酶体酶的作用下，血红蛋白被分解为不含铁的橙色血质和含铁的含铁血黄素。
Perls染色普鲁士蓝反应(Prussianbluereaction)又称为含铁血黄素染色，即经过处理后可以产生蓝色，常见于吞噬细胞内或间质内，主要显示三价铁盐。Perls普鲁士蓝是非常经典的组织化学反应，是显示组织内三价铁的一种敏感、传统优良的方法，在反应后可用红色染色剂进行复染，如核固红、伊红、中性红等。
Perls普鲁士蓝染色试剂盒常用于显示局部组织内的各种出血性病变。在判断含铁血黄素沉积时，用Perls染色可以得到证实，可以很好的区分含铁血黄素和其他色素。本试剂盒稳定性好，可以长期保存，应用范围广。
本试剂盒复染液采用最经典最常用的核固红复染液。
储存条件室温避光保存。
有效期一年。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,核固红法)说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
 2--6-啶-4-羧HTLV 1+2 Ab (min 10 kits)
 6-溴己酯HVA
 烯羟酯(异构体混合物)IAA (Insulin Autoantibody)
 5-溴-2-异烟IBR Blocking AB, 3 steps high sensitivity
 三溴化亚砜ICA (Intra-Cell Autoantibody)
 2,2-二-5-(2,5-二氧)ICAM-1 (Intracellular Adhesion Molecule-1) or CD54
 胍盐盐IgA Salivary Elisa
 1,25,6-双邻异亚-alpha-D-异构糖IgA-CIC Elisa
 5--3-啶-2-羧IgE (Immunoglobulin E) (total)
 2-(2'-羟-3',5'-二叔)并三唑IGF 1 (equine) Elisa
普鲁士蓝染色试剂盒(Perls stain,核固红法)说明书莪术(标准品)英文名(EN)GPNa2,≥98 %特价促销  规格(SP)1G
鹅去胆英文名(EN)4(2Pyridylazo)resorcinol monosodium ...特价促销  规格(SP)1G
鹅去胆(标准品)英文名(EN)4(2Pyridylazo)resorcinol monosodium ...特价促销  规格(SP)1G
噁喹/奥啉英文名(EN)Pyridoxal hydrochloride特价促销  规格(SP)1G
厄贝沙坦英文名(EN)Pyridoxamine dihydrochloride ,特价促销  规格(SP)1G
厄贝沙坦（标准品）英文名(EN)pTolylhydrazine hydrochloride,特价促销  规格(SP)5G
厄多司坦英文名(EN)pTolylhydrazine hydrochloride,特价促销  规格(SP)5G
厄多司坦（标准品）英文名(EN)Serotonin hydrochloride特价促销  规格(SP)500MG
苊（标准品）英文名(EN)2Iminothiolane hydrochloride ,≥98%特价促销  规格(SP)100MG
苊（标准品）英文名(EN)Chondroitin 4sulfate sodium salt特价促销  规格(SP)25G
恶草(分析标准品,97.5%)英文名(EN)Trimethyloxonium tetrafluoroborate特价促销  规格(SP)5G
恶唑(>96%，BC)英文名(EN)2Chlorophenylhydrazine hydrochloride特价促销  规格(SP)1G
恶唑菌(标准品)英文名(EN)3,4Dichlorophenylhydrazine hydrochlor...特价促销  规格(SP)5G
恩拉素,持久杀菌素英文名(EN)2,4Dichlorophenylhydrazine hydrochlor...特价促销  规格(SP)5G
恩诺沙星英文名(EN)1(2Chloroethyl)piperidine hydrochlor...特价促销  规格(SP)25G
恩诺沙星（标准品）英文名(EN)2Mercaptopyridine Noxide sodium salt特价促销  规格(SP)5G
恩曲他滨英文名(EN)Formamidine hydrochloride,≥96.0%特价促销  规格(SP)5G
恩曲他滨（标准品）英文名(EN)Dimidium bromide,≥95.0%特价促销  规格(SP)250MG
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。