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- 品系:
详见说明书
- 细胞类型:
详见说明书
- 肿瘤类型:
详见说明书
- 供应商:
上海一研
- 库存:
48
- 英文名:
转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞
- 年限:
详见说明书
- 运输方式:
电询
- 器官来源:
详见说明书
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 免疫类型:
详见说明书
- 物种来源:
详见说明书
- 相关疾病:
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- 规格:
详见说明书
1.取出小鼠后沥干酒精,放入超净台内,固定在泡沫板上。
2.用镊子提起皮肤,用解剖剪剪开皮肤一个横切口,将皮肤向上撕开,然后剪开肌肉等,暴露出腹腔,在左侧找到脾脏,用弯头眼科镊取出脾脏,置于无菌培养皿中。
3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次,并剔除多余无用的组织。
4.将筛网置于平皿中,脾脏置于筛网上,用弯头镊镊住,轻轻在筛网上进行碾磨,同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。
5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中,离心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培养液,吹打混匀,取样计数。
7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中,轻轻摇晃混匀,在培养瓶上。
产品名称: 转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞说明书
商品货号: EY-Z6678
中文名称: 转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞
细胞污染:HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
细胞传代步骤:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1.
细胞复苏步骤:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例;1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象
实验事项:
1. 转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞说明书试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞说明书现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,同时我司为您提供价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。到达客户手中,1个月内出现任何问题,导致细胞在冻存前死亡,都可以免费再向客户提供一次。
以下是公司正在促销的产品:
抗蛋白酶,5mg Trimethyl[3-(triethoxysilyl)propyl]ammonium Chloride 规格:>98.0%(T)
胆固醇酯酶,100u Trimethyl phosphate 规格:分析标准品
糖化酶,250g Trimethyl Citrate 规格:>98.0%(GC)
糖化酶,100ml Trimethoprim lactate salt
乙酰辅酶A,10mg Trimethoprim 规格:>99.5%,超纯,BP2010,BR,可用于细胞培养
乙酰辅酶A,1mg Trimethoprim 规格:HPLC>98%,标准品
乙酰辅酶A,50mg Trimetazidine Hydrochloride 规格:含量测定"
乙酰辅酶A,5mg Trimetazidine dihydrochloride 规格:>97%,EP
葡萄糖氧化酶,10ku Trimellitic Anhydride 规格:>95.0%(T)
四溴酚兰,1g Mizolastine 规格:HPLC法含量测定"
四溴酚兰,5g Mitoxantrone HCl 规格:进分sigma M6545
伊文斯蓝,100g Mitoxantrone HCl 规格:>98%,USP,可用于细胞培养
伊文斯蓝,10g Mitoxantrone HCl 规格:HPLC>98%,标准品
伊文斯蓝,1g Mitoxantrone 规格:HPLC>97%,BR
硝基氯化四氮唑蓝,1g Mitotane;O,P'-DDD 规格:含量测定
硝基氯化四氮唑蓝,250mg Mitiglinide calcium Hydrate 规格:>99%,BR
硝基氯化四氮唑蓝,5g Mitiglinide calcium Hydrate 规格:HPLC>98%,标准品
氯化硝基四氮唑蓝,1g Mitiglinide Calcium
转入Tet-off调控,含EGFP基因的CHO细胞说明书Mouse Anti-human IgG(3D3)/Gold 胶体金标记的鼠抗人IgG单克隆抗体规格 0.5ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/FITC FITC标记的鼠抗人IgG单克隆抗体规格 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy7 Cy7标记的鼠抗人IgG单克隆抗体规格 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy5.5 Cy5.5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体规格 0.1ml
Mouse Anti-human IgG
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文献和实验1 在 3'UTR 中插入一个 sgRNA 或一个 sgRNA 阵列后,细胞系中 mCherry 报告荧光信号的表达情况。 Part3 通过显微镜观察到的荧光信号反映目标基因转录水平 为进一步探讨荧光报告系统的特性,我们建立了一个可控的 Tet-on 系统,该系统可以通过调节 Dox 的浓度,实现 EGFP 基因不同程度的表达量,进而用来研究报告系统的荧光信号强度是否可以很好地反映目标基因的表达水平。 研究发现,报告系统的 mCherry 表达量和 EGFP 基因的表达量有很强的相关
【求助】用于检测双荧光素酶报告基因的细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?谢谢
lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题,两者的区别我基本清楚了,只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒(分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因)呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话,是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因,还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调控元件?谢谢 msniu
到细胞完全从壁上脱落下来为止。 (4) 加入1ml的含血清培养基终止反应。 (5) 用Tip头多次吹吸,使细胞完全分散开。 (6) 将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。 (7) 用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。 (8) 将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。 (9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。 2、细胞转染 (1)转染试剂的准备 A. 将400ul去核酸酶水加入管中
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