Caspase-3活性测定试剂盒说明书

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
产品名称  Caspase-3活性测定试剂盒说明书
规格： 20T
Caspase-3是凋亡过程中最主要的终末剪切酶，因而也是研究最多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特异水解多种凋亡关键蛋白如PARP，介导细胞核染色质固缩、凋亡小体生成、核DNA断裂。试剂盒测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Aspp-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA)，释放硝基pNA。游离硝基pNA呈黄色在405nm具有最大吸收峰，用普通可见光分光光度比色方法测定。


1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

      Caspase-3活性测定试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
50T 山羊关节炎脑炎病毒PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存
假单胞CFC选择性培养基添加剂(冻干)  1ml*5
100mL 增强型DAB显色试剂盒 Enhanced DAB Chromogenic Kit 4℃保存
1瓶 BeWo细胞株 BeWo 低温运输和保存
动力-盐培养基 Power - nitrate medium 250g
尿素琼脂培养基基础 用于鉴别肠道菌尿素酶试验 250g
0.5 mg LPS （TLR4激活剂） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
50T 霍乱弧菌O1CR检测试剂盒   低温运输，-20℃保存
磷酸盐缓冲稀释液（ph7.2）  9ml*20支
20µL 兔抗GST标签多抗 Anti GST-Tag Rabbit PAb -20℃保存
25mg 核糖核酸酶 A，牛胰 RNase A,Bovine Pancreas  室温干燥保存
2 ug pKJE7 pKJE7 低温运输，-20℃保存
缓冲蛋白胨水 用于沙门氏菌和阪崎肠杆菌的前增菌培养。 225mlX6瓶
CN琼脂平板 英文名称： 产品规格：9cm*10 
100mL Tricine Buffer,0.5M,pH9.0  Tricine Buffer,0.5M,pH9.0  常温保存
液体硫盐培养基管  20ml*10支
葡萄球菌乳胶凝集试剂盒 葡萄球菌乳胶凝集检测试剂用于确证鉴定平板上分离出的可疑金黄色葡萄球菌菌落。该试剂盒仅供专业... 50test
Caspase-3活性测定试剂盒说明书包埋盒   个
猴外周血淋巴细胞分离液试剂盒 2ml/KIT  盒
草达津(标准品) Trietazine 1912-26-1 质量规格：分析标准品
直接蓝71(≥50%,BR) Direct blue 71 4399-55-7 质量规格：≥50%,BR
4-丁氧基邻二腈(>95.0%(GC)) 4-Butoxyphthalonitrile 81560-32-9 质量规格：>95.0%(GC)
钐标准溶液(10μg/ml) Samarium standard 7440-19-9 质量规格：10μg/ml
Alizarin Fluorine Blue 茜素络合指示剂 1g  瓶
吉非替尼(标准品) Gefitinib 1844-35-2 质量规格：HPLC>99%,标准品
称量纸 150mm×150mm 1张-包  包
Tectorigenin 鸢尾黄素 548-77-6  20mg
L-天冬氨酸二酯盐 L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride 323-95-9 质量规格：>98%,BR
4-Nitrophenyl alpha-D-Galactopyranoside 4-硝基-α-D-吡喃半乳糖苷 1mg  瓶
羟基达沙替尼 Hydroxymethyl Dasatinib 910297--4 质量规格：进口
吡罗昔康-d3 Piroxicam-d3 942047-64-5 质量规格：进口
喹那普利（标准品） Quinapril hydrochloride 826-55-8 质量规格：HPLC法含量测定
N-基脲(>97%,BR) N-Phenylurea 236 质量规格：>97%,BR