Caspase-8活性测定试剂盒说明书

产品名称  Caspase-8活性测定试剂盒说明书
规格： 20T
Caspase-8也称FLICE、MACH或Mch5，通常以酶原的形式存在，凋亡时激活，被认为是细胞凋亡转导过程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的凋亡过程中caspase-8被激活形成二聚体，进而激活下游caspase-4、6、9、10。
细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。


1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。

细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

      Caspase-8活性测定试剂盒说明书尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
人血小板衍生生长因子C(PDGF)ELISA试剂盒 78-5000 pg/mL
人转录因子RelB蛋白ELISA试剂盒 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Histamine 7.8-500 ng/mL
ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 4 0.312-20 ng/mL
TFPI2 / PP5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB   IP   50 µg
DBH / Dopamine beta-Hydroxylase 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg
人多功能肽酶2(LMP2)ELISA试剂盒 0.156-10 ng/mL
ALOX15B / 15 Lipoxygenase 2 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg
人无翅型MMTV整合位点家族成员2(WNT2)ELISA试剂盒 0.156-10 ng/mL
ELISA Kit for Human Aquaporin-9 0.312-20 ng/mL
ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor A 78-5000 pg/mL
ACBD7 抗體, 兔單抗 ELISA    50 µg
Caspase-8活性测定试剂盒说明书Paraformaldehyde 多聚 25g  瓶
10-去乙酰巴卡丁III 10-Deacetylbaccatin-III 32981-86-5 质量规格：进口
OSI-420，游离碱（去埃罗替尼） OSI-420, Free Base (Desmethyl Erlotinib) 13-86-0 质量规格：进口
0.2mlPCR管(平盖)，10盒/箱 10支  盒
Tetramethylammonium bromide 四化铵 25g  瓶
Elastase 弹性蛋白酶（猪胰） 1g  瓶
阿利克仑 Aliskiren Hydrochloride 173399-03-6 质量规格：进口
奥美拉唑硫化物 Omeprazole Sulfide 73590-85-9 质量规格：进口
氘代DMSO-D6(10 g ) Dimethyl Sulfoxide-D6 2206--1 质量规格：D,99.8%+TMS 0.03%
Palatinose Hydrate 异麦芽酮糖-帕拉金糖 1g  瓶
2-氯-1,3-丙二醇 2-Chloro-1,3-propanediol 497-04-1 质量规格：进口原装，98%
煌焦油蓝染色液 1ml  瓶
CollagenaseⅡ 胶原酶Ⅱ 1mg  支
Acetylcholine chloride 化乙酰胆碱 5g  瓶
酰西替利嗪 Cetirizine Amide 881-37-2 质量规格：进口
高效RIPA组织-细胞快速裂解液 1ml  瓶