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- 2025年07月10日
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37
- 英文名：
详见说明书
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详见说明书
- 供应商：
上海邦景
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低温冷藏
- 规格：
20T|50T|100T
英文名称：Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
发货周期：1～3天
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-3活性。测定原理基于Caspase-3特异水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA)，释放硝基pNA。游离硝基pNA呈黄色在405nm具有最大吸收峰，用普通可见光分光光度比色方法测定。
使用方法:
1. 悬浮细胞，2000rpm离心5min收集细胞;对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短(过长细胞膜破碎，造成假阳性，过短，细胞黏连影响检测)最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶消化液，加入细胞培养液终止消化，2000rpm离心5min收集细胞。
2. 4℃预冷PBS，洗涤细胞2次（2000rpm x 5min）,收集细胞2～5×105 。
3. 离心弃上清，加入500μL结合缓冲液，轻轻吹打重悬细胞。
4. 加入5μL Annexin V-FITC，轻轻吹打混匀，加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许，可以在检测前5分钟加入PI)
5. 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。
细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
碳酸钠，英文名或英文缩写：wo7ium caonate anxy7nous，级别：AR，99%，规格：50毫克
AmidoBlack10B 5g/10g/100ml Amresco分装
5′CMP5′ 胞苷酸KUBR，99%
碳醋铜;碳醋铜;盐基性碳醋铜 Coppqr ccronctq;Cupric subccronctq;Coppqr ccronctq bcsic 101
SaikosaponinA柴胡皂甙A25克BR，粘度100 mpe.s
天青石兰，英文名或英文缩写：Celestine blue B，级别：高，70%，规格：100克
Acryl/Bis37.5:1,30%Solution 250ml 进口原料自产
ChlorosulphonpxenolS录黄酚S5克CP
纤维速酶 Cqllulcsq froM cspqrgillus nigq 90
Zirconiumxy7noxide偏锆酸500克3N，200目
GLUCOSE,20%STERILESOLUTION20%葡萄糖无菌溶液生物技术级无色至微黄色无混浊液体COLDsigma
(谷胱苷肽还原型)
Yttriumoxide钇氧10克BR，97%
典化酰流代胆减(+4℃) cCqTYLTHIOCHOLINq IODIDq 662
藻红 B Erythrosin B (Dye content, ≥%) 905325 5G 染色剂
DH82(犬巨噬细胞) 5×106cells/瓶×2
DLD-1(人结肠腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
DU 145(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
EAC(小鼠艾氏腹水癌细胞) 5×106cells/瓶×2
Caspase-3活性测定试剂盒图片BPH-1, 人前列腺增生细胞 Human
EB病毒转化的人B淋巴细胞(彝族);HYL
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
大鼠肝细胞瘤;H4-II-E-C3 结肠腺癌细胞，CW-2细胞 R1610细胞，中国仓鼠仓鼠肺细胞
滑膜细胞培养基SM-prf
ICOSLG Others Human 人 ICOSLG / B7-H2 / ICO
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
注意事项：
Caspase-3活性测定试剂盒图片尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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文献和实验JCI 重磅：王福生院士团队发现 HIV 感染者体内 T 细胞损耗元凶！
-1 治疗的一个潜在靶点。 图片来源：JCI 近年来，科学家们对细胞死亡途径的认识有了很大的进展，其中，细胞凋亡和细胞焦亡都被认为是导致 CD4+ T 细胞死亡的原因。机制层面上发现，caspases 家族可以介导调控细胞死亡过程，比如 caspase-3 依赖的细胞凋亡和 caspase-1 依赖的细胞焦亡。 近期的研究表明，大约 5% 的 CD4+ T 细胞耗竭是通过凋亡发生的，而剩下的 95% CD4+ T 细胞的死亡是由于细胞间病毒传播诱导的感染进而触发 caspase-1 介导的焦亡引起
「铲屎官」注意了！剑桥大学揭示这些基因的改变或让猫猫狗狗成为
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。试剂盒比较便宜，KeyGene公司有。 2. 流式细胞法，只要有流式细胞仪，买来试剂盒按照说明操作即可，优点是可以同时检测多种caspase的活性。价格较贵。 3. WB的方法，比较繁琐，通过半定量比较活化caspase蛋白（即裂解的小片段）的量判断活性强弱。 选择哪种方法根据实验要求和条件，1或2同3的联合使用，应该最能说明问题。附件是流式法的一个说明书，个人见解仅供参考。 yqsqzr 那是否可以通过流式
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