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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
T56-LIMKi
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
英文名称：T56-LIMKi
产品规格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
发货周期：1～3天
T56-LIMKi是选择性的LIMK2抑制剂。抑制Panc-1细胞生长的IC50值为35.2μM。
注本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！
CAS号924473-59-6
别名T5601640
纯度98.02%
分子量389.33
储存条件-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：1．LIMK2抑制剂(T56-LIMKi)说明书用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验transcription. A 50 mM (5 mg/454 µl) solution of JNK Inhibitor II (Cat. No. 420128) in DMSO is also available. Calbiochem的说明书。此抑制剂对3型JNK均有抑制作用，IC50有所区别。宣称对JNK的抑制比对ERK1和p38等的抑制要强300多倍。可是，这个应该是有争议的。作为JNK抑制剂起效快，但是特异性还有待研究。 提高特异性的另外一个选择是TAT JBD
dentist昭安 买的信号通路抑制剂（PDTC，LY294002，SB203580），用之前是不是一般都需要做个细胞活力检测的？如台盼蓝或MTT？ 做MTT的话，一般是设几个不同的浓度组，作用一定时间（24h?）后检测？ 是这样设计的吗？ 那不同的抑制剂浓度分组一般选择哪几个浓度呢？是按说明书规定的作用范围在其中选择几个组，还是参考文献？但这方面类似文献看到的好像不是很多，感觉别人一般都不做
【求助】PKC抑制剂Bisindolylmaleimide区别
hydrochloride I hydrochloride等10中不同的试剂，有些说是针对大鼠脑PKC的（说明书），我不知是否指组织特异性（英文理解力有限）？但I II VI我还未看出有什么区别！文献大多选用I，但I要9000多人民币，其它同等量的一般只要1000多，所以我想看看其他的究竟与I有什么区别？能不能替代？希望各位发表一下看法！谢谢！说明书我已经看过了，没看出区别所在。 Bis是光谱pkc抑制剂, 没有见到过其具有不同亚型特异性抑制作用的证据或报道. 9000多人民
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