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- 2025年07月13日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
59
- 英文名：
RPMIMedium1640
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海抚生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
500ml
规格： 500ml
别名 1640培养基
英文名称 RPMIMedium1640
储存条件 2-8℃，避光，有效期1年
单位500ml/瓶20瓶/箱
Cellculturetested,sterilereagent.
withL-Glutamine
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
1. 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作。
2. 反应完毕后请尽快检测，反应1 小时后荧光强度就开始衰变。
3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物质，在操作时请注意避光。
4. 试验操作过程中佩戴手套等防护用品。
5. 试验开始前将一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超纯水（1:9）稀释至 1×备用。
1.RPMIMedium1640（含双抗）价格具有多年的销售经验和资深的行业背景，我司秉承质量优先的理念，重视自主创新，希望广大科研工作者与我司达成长期的合作关系；
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文献和实验基（III） hCOs 形成培养基（I） hCOs 形成培养基（II） hCOs 形成培养基（III） hCOs 形成培养基（IV） 近岸蛋白产品货号 基础培养基 DMEM-F12 RPMI-1640 RPMI-1640 RPMI-1640 RPMI-1640 RPMI-1640 DMEM-F12 RPMI-1640 RPMI-1640 RPMI-1640 penicillin-streptomycin
液：用 DMSO 配置终浓度为 5 mM 的 CFSE 溶液（1000×）RPMI 1640 完全培养基：RPMI 1640 培养基 + 10% 血清 + 1% 双抗☟☟☟— 实验正式开始 —1. 脾淋巴细胞的制备无菌操作取出小鼠脾脏，研磨成单细胞悬液，用红细胞裂解液或者小鼠淋巴细胞分离液去除红细胞，将细胞过 40 μm 细胞滤网后，进行细胞计数。样本清洗液洗涤（可用 PBS 或者不含血清双抗的培养基代替），1 500 rpm 离心 5 min，用 PBS 重悬，调整细胞浓度为 107/ml。2. CFSE
实验步骤采血：需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。分离淋巴细胞：采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液（已37℃预热），3000rpm离心30min。收集白细胞层，转移至另一离心管中，加入10mL1640（含1%双抗），轻轻吹打均匀，1500 rpm离心15min。弃上清，如此反复洗涤3次，收集白细胞。转化取1 mL全培
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