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启动子名称 | 启动子大小 | 组织特异性 |
ALB | 2.4kb | 肝脏特异性 |
CAG | 944bp | 广泛表达的强启动子 |
CamKIIa | 1.2kb | 大脑皮层和海马神经元特异性启动子 |
CMV | 0.6kb | 广泛表达的强启动子 |
EF1A | 1.2kb | 广泛表达的启动子(尤其在体内稳定表达) |
GFAP | 1.0kb | 星形胶质细胞特异性启动子 |
aMHC | 0.4kb | 心肌α肌球蛋白重链启动子 |
cTNT | 702bp | 心肌特异性 |
Synapsin | 471bp | 成熟神经元特异性启动子 |
Rpe65 | 700bp | 视网膜特异性 |
3Xenhancer McK | 728bp | 小鼠中肌肉特异性启动子 |
NSE | 1.3kb | 神经元特异性烯醇化酶启动子 |
IRES和P2A的比较 | ||
IRES | P2A | |
定义 | IRES内部核糖体进入位点序列:是一段约500bp的核酸序列,这类RNA序列能折叠成类似于起始tRNA的结构,从而介导核糖体与RNA结合,能独立的起始蛋白翻译。 | P2A肽(2A peptide)是一种可”自我剪切”的短小肽链,最初在FMDV中发现,约22个氨基酸,2A肽可在蛋白翻译时通过核糖体跳跃从自身最后2个氨基酸C末端断裂。 |
优点 | IRES被放置于两个ORF之间的时候,可以同时表达这两个ORF。由于两个ORF分别有自己的起始密码子和终止密码子,所以会翻译两个独立的、没有经过修饰的蛋白。 | 两个基因(ORF)通过2A多肽链连接成为一个ORF,mRNA翻译成一个融合蛋白,但这两个融合蛋白会被识别2A的蛋白酶切成两个蛋白。这两个蛋白的摩尔比理论上是1:1。 |
缺点 | IRES的存在有时候会影响mRNA的结构,同时由于IRES和mRNA的5’CAP对核糖体/或翻译起始复合物的结合力不同,IRES后面的ORF翻译蛋白的水平有可能与IRES前面的ORF蛋白水平不一致。有的时候前面的ORF表达很好,但后面的ORF表达水平不高;有的时候后面的ORF和/或IRES会影响前面ORF的表达,甚至前面的ORF根本不表达。 | 2A是一个大约22个氨基酸的多肽。蛋白酶切割会发生在2A多肽C端的甘氨酸(G)和脯氨酸(P)之间。所以,前一个蛋白的尾巴上会留下一个20多个氨基酸的多肽。后面一个蛋白的N端会留下一个多余的脯氨酸。尤其是第1个蛋白,如果是一个小分子(比如分泌型的细胞因子),可能其功能会受到这20多个氨基酸的影响。 |
建议 | IRES序列后基因的表达效率显著低于IRES序列前基因的表达,所以与IRES相比,2A肽具有以下优点:(1)2A序列短,能够有效地实现连接基因之间的共表达;(2)位于2A下游的基因同样可以获得很高的表达水平。 |
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